七筋菇植物ISSR-PCR反应体系研究  

Study on ISSR-PCR reaction system for Clintonia udensis Trautv.et Mey.

作　　者：王祎玲[1] 廖海民[1] 赵桂仿[1] 

机构地区：[1]西北大学生命科学学院

出　　处：《山地农业生物学报》2006年第1期34-38,共5页Journal of Mountain Agriculture and Biology

基　　金：国家教育部博士点基金资助项目(20040697010)

摘　　要：为建立适宜于七筋菇Cliatonia udensis Trautv．et Mey．ISSR—PCR分析的扩增体系，确定引物适宜的退火温度，利用正交试验设计，从Mg^2＋浓度、dNTP浓度、Taq DNA聚合酶单位、引物浓度4种因素4个水平，对七筋菇ISSR—PCR反应体系进行优化。结果表明，根据Tm-5℃±5℃设定引物的退火温度梯度，确定出不同引物的最适退火温度。对引物873来说，其最适退火温度为53℃。按照正交试验设计，测试不同引物各因子之间在不同水平的组合情况，确定不同引物的最佳组合体系。引物897在第10组合反应最佳即3．0mmd·L^-1Mg^2＋；0．2mmol·L^-1d NTP；0．1μL Taq DNA聚合酶；0．2μmol·L^-1引物浓度。确定10μL的反应体系中，Mg^2＋为2．5—3．0mmol·L^-1，dNTP为0．15～0．20mmol·L^-1，引物浓度为0．20—0．25μmol·L^-1，Taq DNA聚合酶为0．1μL，模板DNA用量为50ng。适宜的退火温度为48—62℃。A suitable LSSR - PCR amplification system of Clintortia udertsis Trautv. et Mey, was established and the annealing temperature of primers was affirmed. Orthogonal design was used to optimize the reaction condition of ISSR experiment in four factors （Mg^2＋, dNTP, Taq polymerase deaage, primer） at four levels respectively. Based on Tm -5/℃ ±5℃ to designa temperature grades, the annealing temperature of different primer was tested. For 873, its annealing temperature was 53℃. Different factors＇ combination on different level was tested for different primers, the optimal combination system of different primers was found. And the tenth combination of primer 897 was the best （3. 0 mmol·L^-1 Mg^2＋ ;0. 2mmol·L^-1 dNTP; 0.1μL Taq DNA polymerase dosage; 0. 2μmol·L^-1 primer concentration）. PCR reaction volume of 10μL, 2. 5 - 3.0mmol·L^-1 Mg^2＋ , 0. 15 -0. 20mmol·L^-1 dNTP, 0. 20 -0. 25μmol·L^-1 Sprlmer concentration, 0.1μL Taq DNA polymerase dosage, 50ng template DNA. And proper annealing temperature was 48 -62℃.

关 键 词：七筋菇 简单重复间序列 正交设计 每件优化 影响因素 

分 类 号：Q949.718[生物学—植物学]