重组2型腺病毒相关病毒体外基因转导人胚肾293细胞与人颌下腺细胞的研究  

Recombinant adeno-associated virus serotype 2-mediated gene transfer to human embryonic cell 293 and human submandibular gland cells

作　　者：海波[1] 刘怡[1] 孙其飞[1] 张春梅[1] 王松灵[1] 

机构地区：[1]首都医科大学口腔医学院基因治疗分子生物学实验室及涎腺疾病中心

出　　处：《北京口腔医学》2006年第1期5-8,共4页Beijing Journal of Stomatology

基　　金：国家杰出青年科学基金资助(No:30125042)

摘　　要：目的研究重组2型腺病毒相关病毒(recombinant adeno-associated virus serotype2,rAAV2)介导的β-半乳糖苷酶基因和人红细胞生成素(human erythropoietin,hEPO)基因在人胚肾293(human embryonic cell293,HEK293)细胞与人颌下腺细胞(human submandibular gland,HSG)的体外表达,为进一步的涎腺基因转导提供研究基础。方法用感染复数(multiplicity of infection,MOI)为105的携带β-半乳糖苷酶基因的腺病毒相关病毒(rAAV2LacZ)转导HEK293细胞和HSG细胞,组织化学方法检测β-半乳糖苷酶基因表达,计数转导效率。用MOI分别为103、104和105的携带hEPO基因的腺病毒相关病毒(rAAV2hEPO)转导HEK293细胞和HSG细胞,ELISA法测定hEPO含量。结果rAAV2介导的β-半乳糖苷酶基因转导HEK293与HSG后组织化学染色显示转导率分别为68·2%和66·3%。rAAV2介导的hEPO基因转导HEK293细胞与HSG细胞后,随MOI值增加和时间的延长,hEPO的浓度增高。MOI=105,转导后72h时,HEK293细胞培养基中的hEPO浓度达到482·54mU/ml,HSG细胞培养基中的hEPO浓度为458·22mU/ml。结论rAAV2载体在体外可以有效转导涎腺细胞,可以进一步应用于动物体内实验。Objective To investigate recombinant adeno-associated virus serotype 2 （rAAV2）-mediated β- galactosidase and human erythropoietin （hEPO） gene transfer to human embryonic cell 293 （HEK293） and human submandibular gland （HSG） cell in vitro. Methods A recombinant adeno-associated virus serotype 2 encoding β- galactosidase （ rAAV2LacZ ） or human erythropoietin （ rAAV2hEPO ） was constructed. The LacZ and hEPO gene were transfered into HEK293 and HSG cells. The expression of β-galactosidad was detected by histochemical staining and the hEPO detected by ELISA methods. Results Expression of β-galactosidase was found in 68. 2% of HEK293 cells and 66. 3% of HSG cells 24 hours after rAAV2LacZ infection. Human EPO level was virus dose dependent after in vitro infection of HEK293 and HSG cells. Conclusion Recombinant AAV2 can transfer a foreign gene into salivary gland cells in vitro.

关 键 词：Β-半乳糖苷酶 人红细胞生成素 基因转导 病毒载体 颌下腺 

分 类 号：R346[医药卫生—基础医学]