禽流感病毒H5和H9亚型多重RT-PCR快速检测方法的建立  

Multiplex RT-PCR for Detection of Different Subtype(H5 and H9) of Avian Influenza Virus

作　　者：耿士忠[1] 曾显营[1] 潘志明[1] 黄金林[1] 焦新安[1] 刘秀梵[2] 

机构地区：[1]扬州大学生物科学与技术学院,江苏扬州225009 [2]扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室,江苏扬州225009

出　　处：《中国兽医学报》2006年第2期160-161,共2页Chinese Journal of Veterinary Science

基　　金：国家"十五"重点科技攻关计划项目(2004BA519A24);江苏省"六大人才高峰"项目(G2002-026);上海市科技兴农项目(2002-3-4-2);扬州大学生物科学与技术学院基金项目

摘　　要：根据禽流感病毒(A IV)核蛋白(NP)和血凝素(HA)基因序列,设计1对用来鉴定A型A IV特异性引物(NP-F,NP-R)和2对用来鉴定A IV H 5和H 9不同亚型特异性引物(H 5-F,H 5-R;H 9-F,H 9-R),建立了多重RT-PCR快速检测方法。该方法能同时从一种病毒扩增出2条核酸带,分别为型(NP:330 bp)和亚型(H 5A:550 bp,或H 9A:490 bp)。通过对105份样品进行检测,并与病毒分离及琼脂扩散(AGP)血清学方法作平行对比,两者之间符合率达100%;试验灵敏度为102ELD50。结果表明,建立的多重RT-PCR为检测H 5、H 9亚型A IV提供了一种快速、经济、易行的技术。A method of multiplex RT-PCR for detecting the different subtypes （H5 and H9） of avian influenza virus（AIV）, based on reverse transcriptase （RT） and polymerase chain reaction （PCR） technique,was developed to amplify at the same time the two specific gene fragments of AIV ：NP gene fragment （330 bp） which determine the type of AIV and HA gene fragment （H5：550 bp;or Hg： 490 bp） which determine the subtype of AIV. Compared with agar gel precipitation （AGP）serological method, 105 samples were determined for the different sub-types （H5 and Hg） by RT-PCR. The sensitivity of multiplex RT- PCR is up to 10^2ELD50. The results revealed that multiplex RT-PCR is a very rapid, sensitive and specific molecular assay for detection and subtyping （H5 and Hg） of the avian influenza.

关 键 词：禽流感病毒 核蛋白基因 血凝素基因 多重RT—PCR 

分 类 号：S852.65[农业科学—基础兽医学]