濒危植物七子花ISSR反应体系的优化  

Optimization of ISSR reaction system in endangered plant Heptacodium miconioides

作　　者：李钧敏[1] 金则新[1] 

机构地区：[1]台州学院生态研究所,浙江临海317000

出　　处：《福建林学院学报》2006年第2期169-172,共4页Journal of Fujian College of Forestry

基　　金：浙江省自然科学基金资助项目(399203);台州市科技局资助项目(044205)

摘　　要：以濒危植物七子花基因组DNA为研究对象,测试了ISSR-PCR反应体系的最适退火温度,并利用单因素试验测试了镁离子浓度,dNTP浓度,模板DNA含量,Taq DNA聚合酶量、BSA浓度、引物用量、甘油浓度对反应结果的影响,可知七子花ISSR分析较适宜的扩增条件是:10μL PCR反应体积,1×Taq酶配套缓冲液(10 mmol.L-1Tris.HC l pH 9.0,50 mmol.L-1KC l,0.1%Triton X-100),2.0 mmol.L-1MgC l2,0.75 U Taq酶(上海华美公司),10 ng模板DNA,6 pmol引物(上海Sangon公司);dATP、dCTP、dGTP、dTTP各0.2 mmol.L-1.The ISSR reaction system of endangered plant Heptacodium miconioides was optimized. The annealing temperature was confirmed and the effect of Mg^2＋ concentration, dNTP concentration, DNA templates dosage, Taq DNA polymerase dosage, BSA concentration, primer dosage and glycerol concentration on ISSR amplification were tested by using single factor method. The optimal reaction system of ISSR for H. miconioides was determined as follows： 1× Taq polymerase corresponding buffer （10 minol·L^-11 Tris·HCl pH 9.0, 50 mmol·L^-1 KCl, 0. 1% Triton X-100） , 2.0 mmol·L^-11 MgCl2, 0.75 U Taq DNA polymerase, 10ng template DNA, 6μmol primer, 0.2 mmol·L^-1 dATP, dCTP, dGTP, dTYP for each in total 10 μL reaction volume.

关 键 词：七子花 ISSR 优化 

分 类 号：Q948.1[生物学—植物学]