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作 者:张海予[1] 林敏[2] 平淑珍[2] 尤崇杓 朱玉贤[3]
机构地区:[1]中国农业大学生物学院 [2]中国农业科学院原子能利用研究所,北京100094 [3]北京大学生命科学学院,北京100083
出 处:《农业生物技术学报》1996年第1期95-100,共6页Journal of Agricultural Biotechnology
摘 要:采用 PCR 技术,获得含粪产碱菌(Alcaligenes faecalis)nifH 基因启动子的0.6 kbHind Ⅲ-BamHI 的扩增片段,核苷酸序列分析结果表明,该 PCR 产物的序列与已报道的模板 nifH启动子序列完全一致。通过两轮基因连接、转化和筛选,获得 nifH 启动子与 gusA 正向连接的融合基因表达载体 pTGY7。经三亲结合将 pTGY7导入粪产碱菌中,证明该融合基因能在结合子中正常表达。采用融合基因表达的组织化学定位方法,研究粪产碱菌在根表和根内的定殖和 nifH 基因的表达,结果表明在低铵浓度下,粪产碱菌能紧密地结合在水稻根表,部分菌体能侵入根内,nifH::gusA 融合基因在根际联合固氮体系中能高水平表达。Using PCR technique,the 0.6 kb Hind Ⅲ-BamH Ⅰ amplified fragment contained nifH pro- moter of A.faecalis had been cloned.Analysis of nucleoitide sequence showed that nucleoitide sequence of PCR product is same as that of nifH promoter reported previously.Through two round of linkage,transfor- mation and selection,nifH∷gusA fusion gene was constructed in broad-host-range vector pFAJ31, namely pTGY7.The nifH∷gusA fusion gene was introduced into A.faecalis by triparent conjugation.The transconjugatant showed high β-Glucurondiase activity in the free-living condition.Studies on coloniza- tion of rice roots using the transconjugatant contained nifH∷gusA fusion gene indicated that a close colo- nization of rice A.faecalis to rice roots.Histochemical analysis showed nifH∷gusA fusion could express at the high level in the endorrhizosphere of rice.It was confirmed that A.faecalis can enter the rice root and fix nitrogen there.
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