荧光假单胞菌G2-EPSP合酶的拆分和intein介导的活性恢复  

作　　者：顿宝庆[1] 陆伟[1] 张维[1] 平淑珍[1] 王旭静[1] 陈明[1] 徐玉泉[1] 金丹[1] 王劲[1] 赵仲麟[1] 梁爱敏[1] 侯松娜[1] Ming-Qun Xu 林敏[1] 

机构地区：[1]中国农业科学院生物技术研究所 [2]New Egland Biolabs,Inc.,Beverly,Massachusetts 01915,USA

出　　处：《科学通报》2006年第12期1479-1481,共3页Chinese Science Bulletin

基　　金：国家重点基础研究发展规划（批准号2001CB108904）;国家高技术研究发展计划（批准号2004AA214170）资助项目.

摘　　要：利用GPS-LS接点扫描系统,在荧光假单胞菌G2的5-磷酸烯醇式丙酮酸莽草酸-3-磷酸合酶编码基因aroA中随机插入15 bp(即编码5个氨基酸短肽)的外源片段,建立含一系列不同插入位点的aroA突变体库．利用内源aroA基因缺失的大肠杆菌突变株ER2799对突变体库进行功能互补筛选,测序后确定了12个可以忍受5个氨基酸插入的位点,其中位点F295／T296经Ssp DnaE内含肽(intein)介导的蛋白互补技术鉴定为可拆分和蛋白重建的位点．从位点F295／T296将G2-EPSPS基因一分而二,N-端和C-端片段分别连接在携带Ssp DnaE内含子元件的原核表达双质粒上,获得共转化质粒pMEPSN295IN和pKEPSc296Ic．将质粒pMEPSN295IN和pKEPSc296Ic分别或共转化内源aroA基因缺失的大肠杆菌突变株ER2799中,携带共转化质粒的重组子能够在M9限制性培养基生长,而携带单一质粒的不能生长,表明从位点F295／T296拆分的aroA基因在内含肽介导下实现了蛋白重建,在突变株ER2799中恢复了5-磷酸烯醇式丙酮酸莽草酸-3-磷酸合酶活性,酶活水平达到野生型的62．92％,为4．48 U/mg．

关 键 词：基因拆分 内含肽(intein) 蛋白重建 转基因 

分 类 号：Q78[生物学—分子生物学]