胶质细胞源性神经营养因子(△N39)-R9神经营养活性和透过血脑屏障的研究  

Analysis of GDNF(△N39)-R9 Fusion Protein Delivery Across The Cellular Membrane,Blood Brain Barrier and Biological Function

作　　者：崔敏[1] 潘新[2] 王丽梅[3] 

机构地区：[1]山东大学医学院生理研究所,济南250012 [2]山东大学齐鲁医院骨外科,济南250012 [3]中国海洋大学医学院海洋药物研究所,青岛266003

出　　处：《生物化学与生物物理进展》2006年第8期738-744,共7页Progress In Biochemistry and Biophysics

基　　金：国家自然科学基金资助项目(30572171);国家重点基础研究发展计划(973)资助项目(2003CB716400).~~

摘　　要：为了研究胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)在中枢神经系统疾病中的治疗应用,运用基因突变、蛋白质融合表达和蛋白质纯化技术获得分子质量较小的GDNF(!N39)活性片段.将HIV-1Tat蛋白转导区(proteintransductiondomain,PTD)的9个碱性氨基酸49RKKRRQRRR57模拟物9个精氨酸(R9)与GDNF("N39)活性片段融合表达,获得纯度达95%以上的GDNF(#N39)-R9融合蛋白.将GDNF、GDNF($N39)、GDNF(%N39)-R9分别加入原代培养的中脑多巴胺能神经元和转染GDNF受体GFR&1和Ret的PC12细胞中,观察它们的神经营养活性和毒性.运用脑微血管内皮细胞株B-Endo3,观察GDNF(’N39)-R9蛋白穿越血管内皮细胞膜的功能;运用脑血管内皮细胞和Matrigel铺板模拟血脑屏障,Transwell法检测Tat-GDNF((N39)蛋白穿越脑血管内皮细胞和外周胶质膜的能力.结果显示:GDNF()N39)-R9蛋白具有类似GDNF的神经营养活性,促进原代培养的中脑多巴胺能神经元和稳定表达GFR*1和Ret受体的PC12-GFR+1-Ret细胞株的存活,没有显示毒性,并且能很好地穿过脑微血管内皮细胞层和模拟的血脑屏障.In order to study the application of glial cell line-derived neurotrophic factor （GDNF） in clinic, gene mutation, fusion protein expression in E.coli and purification methods have been used to obtain the fragments of GDNF, GDNF（△N39）, GDNF（△N39）-Rg. Using primary cultured dopaminergic neurons and PC12 cells with transfected with GFRα1 and Ret to observe their biological function and cytotoxicity. Using B-Endo3 cells and Transwell method to analyze their delivery across the cellular membrane and blood brain barrier. The results show that GDNF （△N39）-R9 has the same neurotrophic function with wild GDNF and nearly no cytotoxicity to dopaminergic neurons and PC12-GFRα1-Ret cells and can get through effectually the cellular membrane and simulacrum of blood brain barrier with matrigel and B-Endo3.

关 键 词：胶质细胞源性神经营养因子(GDNF) 融合蛋白 脑微血管内皮细胞(B-Endo 3) 蛋白质转运 血脑屏障 

分 类 号：Q73[生物学—分子生物学]