藻胆蛋白ApcE缺失突变体的自催化重组研究  

Autocatalytic Reconstitution of Deletion Mutants of Phycobiliprotein ApcE

作　　者：刁红丽[1] 甘春晖[2] 周明[2] 赵开弘[1] 

机构地区：[1]华中科技大学生命科学与技术学院 [2]华中科技大学环境科学与工程学院,武汉430074

出　　处：《武汉理工大学学报》2006年第10期49-51,92,共4页Journal of Wuhan University of Technology

基　　金：国家自然科学基金(3027032690201001)

摘　　要：采用聚合酶链式反应(PCR)扩增出Anabaena.spPCC7120别藻蓝蛋白ApcE(1-240)的一系列缺失突变体基因:apcE(14-240)、apcE(25-240)、apcE(63-240)、apcE(85-240)、apcE(121-240)、apcE(133-240)、apcE(187-240),在大肠杆菌中高效表达分别获得相对应的缺失突变体蛋白。对上述脱辅基蛋白与藻蓝胆素(PCB)的体外自催化重组进行了研究。结果表明:在含有4 mol/L尿素的磷酸钾缓冲体系中,ApcE(25-240)脱辅基蛋白可与藻蓝胆素体外重组实现共价连接,获得的色素蛋白质具有最大吸收峰(λmax=656 nm)和荧光发射峰(λmax=670 nm),其余6个缺失突变体蛋白仅能与藻蓝胆素非共价连接,不能发生自催化重组。该结果为进一步研究连接多肽ApcE的结构和功能提供了信息,具有重要意义。Genes of deletion mutants of phycobilisome core-membrane linker protein ApcE in Anabaena sp. PCC7120 were constructed by PCR： apcE（14-240）, apcE（25-240）, apcE（63-240）, apcE（85-240）, apcE（121-240）, apcE（133-240）, apcE（187-240）. All deletion mutants were overexpressed in Escherichia, Coli, The activities of expressed proteins were studied through in vitro reconstitution tests, which showed ApcE（25-240） could bind covalently phycocyanobilin（PCB） in an autocatalytic reaction, in the presence of 4 mol/L urea necessary to solubilize the protein, and the resulting biliprotein had absorption maxima（λmax = 656 nm）and fluorescence maxima（λmax = 670 nm）, The results also showed ApcE（14-240）, ApcE（63-240）, ApcE（85-240）, ApcE（121-240）, ApcE（133-240）, ApcE（187-240） could not bind covalently phycocyanobilin（PCB） in the autocatalytic reaction, in the buffer containing 4 mol/L urea,

关 键 词：藻胆体 藻蓝胆素 ApcE 缺失突变体 体外重组 自催化连接 

分 类 号：Q754[生物学—分子生物学]