人类胎儿骨髓间充质干细胞的白细胞抗原表达特征  

HLA expression in human fetal bone marrow mesenchymal stem cells

作　　者：陈晓路[1] 陈苹[2] 贾竹青[2] 刘羿男[2] 马康涛[2] 张永珍[1] 周春燕[2] 

机构地区：[1]北京大学第三医院心内科 [2]北京大学基础医学院生物化学与分子生物学系

出　　处：《北京大学学报（医学版）》2006年第6期597-602,共6页Journal of Peking University:Health Sciences

基　　金：北京市科学技术委员会重大项目(H020220010490);"十五"国家科技攻关(2004BA714B05-1);北京大学985项目基金资助~~

摘　　要：目的：对体外培养不同代数流产胎儿骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cells，MSCs）的人类白细胞抗原Ⅰ类（human leukocyte antigen，HLA-Ⅰ）和HLA-Ⅱ类抗原表达情况以及经过不同浓度干扰素γ（IFN-γ）作用后HLA-Ⅰ类和HLA-Ⅱ类抗原的表达变化进行观察，为建立干细胞库进行细胞移植提供体外实验证据。本研究经北京大学医学部伦理委员会批准。方法：胎儿MSCs取自23～24周流产胎儿，体外培养后取第5和第12代的细胞，流式细胞仪分析HLA-Ⅰ类和HLA-Ⅱ类抗原的表达水平。经过终质量浓度为5μg／L或50μg／L的IFN-γ处理后，于24，48，72，96，120h检测HLA-Ⅰ类和HLA-Ⅱ类抗原的表达；并用RT-PCR方法定性分析第13代细胞HLA-E和HLA-G的mRNA表达。结果：胎儿骨髓MSC表达HLA-Ⅰ类抗原，几乎不表达HLA-Ⅱ类抗原。IFN-γ可以上调MSCs的HLA-Ⅰ类和HLA-Ⅱ类抗原。流式细胞分析显示HLA-Ⅰ类抗原阳性细胞占总细胞的比例超过50％，但HLA-Ⅱ类抗原阳性细胞不到10％。经过50μg／L的IFN-γ处理后，第5代细胞HLA-Ⅰ类抗原阳性细胞百分率及荧光强度与未经处理的细胞相比明显增加，且荧光强度随时间延长呈现递增趋势。第12代细胞HLA-Ⅰ类抗原阳性细胞百分率及荧光强度的上调幅度明显低于第5代细胞。相同浓度IFN-γ（50μg／L）作用于第5代和第12代细胞均可上调HLA-Ⅱ类抗原，第5代细胞于48h开始上调（59．9％），第12代细胞于72h开始上调（48．1％）。第12代细胞HLA-Ⅱ类抗原上调幅度低于第5代细胞。不同浓度IFN-γ（5μg/L和50μg／L）处理后，HLA-Ⅰ类抗原和HLA-Ⅱ类抗原阳性细胞百分率均明显增加。RT-PCR结果显示，胎儿骨髓MSCs有HLA-E和HLA-G抗原的mRNA水平表达。结论：胎儿骨髓MSCs可以被IFN-γ诱导上调HLA-Ⅰ类和HLA-Ⅱ类抗原表达。体外培养传代能减低IFN-γ作用后的抗原上调幅度。胎儿骨髓MObjective： To investigate the expression of human leukocyte antigens （HLA） in human fetal bone marrow mesenchymal stem ceils （MSCs） after long time culture as well as the changes in response to interferon-γ （IFN-γ） treatment. Methods： Human fetal MSCs were collected from 23 to 24- weeks-old fetues with the approval of Ethic Committee of Peking University Health Science Center. The ceils of passage 5 and passage 12 were analyzed for HLA expression before and after IFN-γ（50μg/L） treatment by flow cytometry at different time points. The passage 5 ceils were also treated with an addi- tional dose of IFN-γ（5 μg/L） and the HLA expression was analyzed 24, 48, 72, 96 and 120 h after treatment. RT-PCR was used to evaluate HLA-G and HLA-E expression at mRNA level in human fetal MSCs. Results： Flow cytometry results showed that fetal MSCs expressed high level of HLA class Ⅰ （ HLA- Ⅰ ） antigen, but extremely low level of HLA class Ⅱ （ HLA-Ⅱ ） antigen. The percentage of HLA-Ⅰ positive MSCs in total MSCs was approximately over 50%, while that of HLA-Ⅱ positive MSCs in total MSCs was less than 10%. IFN-γ （50μg/L） enhanced the HLA- Ⅰ and HLA-Ⅱ expression in a time dependent manner and increased the percentage of HLA-Ⅰ positive ceils in both passage 5 and pas- sage 12 ceils but preferably in passage 5 ceils. The enhanced HLA-Ⅱ expression was seen 48 h after IFN-γ treatment in passage 5 ceils （59.9%） but 72 h in passage 12 cells （48.1%）. The treatment of 5μg/L IFN-γ also increased percentage of HLA-Ⅰ and HLA-Ⅱ positive MSCs, but with a relatively less extent compared to the 50μg/L IFN-γ treatment group. RT-PCR result indicated HLA-G and HLA-E were expressed at mRNA level in human fetal MSCs. Conclusion： Human fetal MSCs can be induced to express both HLA class Ⅰ and class Ⅱ antigens by IFN-γ. The long time culture might reduce the IFN-γ effects. Human fetal MSCs express HLA-G and HLA-E at mRNA level.

关 键 词：骨髓细胞 间质干细胞 HLA抗原 干扰素类 细胞 培养的 

分 类 号：R349.1[医药卫生—基础医学]