H7亚型禽流感病毒HA基因在杆状病毒系统中的表达  

Expression of H7 subtype avian influenza HA protein in baculovirus system

作　　者：郝婧[1] 邓国华[1] 姜永萍[1] 曲站红[1] 王桂芹[1] 郝永清[2] 陈化兰[1] 

机构地区：[1]中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室,黑龙江哈尔滨150001 [2]内蒙古农业大学动物科学与医学学院,内蒙古呼和浩特010018

出　　处：《中国预防兽医学报》2007年第4期268-271,共4页Chinese Journal of Preventive Veterinary Medicine

摘　　要：利用PCR反应,以特异性引物扩增禽流感病毒去除信号肽的H7亚型HA密码子优化基因,克隆到杆状病毒转移载体pFastBac-HTB中,转座DH10感受态细胞,通过蓝白斑筛选、PCR鉴定获得阳性克隆,然后提取基因组Bacmid,转染Sf9昆虫细胞,得到含H7亚型流感病毒HA基因的重组杆状病毒opti-H7HA-Bac。重组杆状病毒接种Sf9昆虫细胞,待绝大部分细胞产生细胞病变后收获细胞,细胞裂解产物经血凝试验、SDS-PAGE及Western blot分析证实。密码子优化的H7 HA基因在重组杆状病毒opti-H7HA-Bac感染Sf9细胞后获得高效表达,且具有良好的蛋白活性及特异免疫反应原性。The opti-H7HA gene of H7 subtype AIV was PCR amplified from the opti-H7HA-pucl9 plasmid using specific primers. The PCR product was used to construct opti-HTHA-bac recombinant baculovirus using Bac-to-Bac baculovirus expressing system. Expression of opti-HTHA was confirmed by HA test, SDS-PAGE and Western blot. High level of protein expression was detected in SD cells following baculaovirus infection. The recombinant protein possesses an active functionality and strong immunogenicity.

关 键 词：禽流感 H7亚型 HA基因 重组杆状病毒 

分 类 号：S852.659.5[农业科学—基础兽医学] Q786[农业科学—兽医学]