两步串联层析法纯化鼠抗人CD28单克隆抗体2F5  

作　　者：马泓冰[1] 孙中文[1] 徐颖[1] 李文香[1] 陶然[1] 陈洁[1] 张学光[1] 

机构地区：[1]苏州大学医学生物技术研究所,江苏苏州215007

出　　处：《细胞与分子免疫学杂志》2007年第2期152-154,共3页Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology

基　　金：国家自然科学基金重点项目(30330540);江苏省干细胞重点实验室基金资助项目(2003年)

摘　　要：目的建立从小鼠腹水中纯化鼠抗人CD28单克隆抗体(mAb)2F5的两步串联层析法。方法将含mAb2F5的腹水经离心、过滤及缓冲溶液变换预处理后,先经固相化金属螯合亲和层析法(immobilizedmetalaffinitychromatography,IMAC)纯化,去除大部分杂蛋白,再经凝胶过滤层析法(gelfiltration,GF)精细纯化,并探讨了上样的流速和洗脱液的种类对mAb2F5纯度的影响。纯化的mAb2F5的生物学活性用3H-TdR掺入法进行分析。结果以两步串联层析法纯化的鼠抗人CD28mAb2F5的纯度大于90%,总回收率达70%。纯化的mAb2F5在体外对PBTC具有明显的促增殖作用;而且其促增殖作用的活性优于ProteinG亲和层析法(affinitychro-matography,AC)纯化所获得mAb。结论建立的两步串联层析纯化方法操作简便,所得mAb的纯度高、生物学活性好。

关 键 词：固相化金属螯合层析法 凝胶过滤层析法 纯化 单克隆抗体 

分 类 号：R392.11[医药卫生—免疫学]