冠状病毒核衣壳蛋白与延伸因子-1α的相互作用  

The Interactions Between EF-1α and N-Proteins of Coronavirus

作　　者：王秋娜[1] 周冰[1] 刘萱[1] 杨尧[1] 李晓明[1] 陈亮[1] 靳彦文[1] 李平[1] 马清钧[1] 曹诚[1] 

机构地区：[1]军事医学科学院生物工程研究所,北京100850

出　　处：《生物技术通讯》2007年第3期363-367,共5页Letters in Biotechnology

基　　金：国家高技术研究发展计划重大专项(2005AA218080)

摘　　要：目的:分析SARS冠状病毒(SARS-CoV)核衣壳蛋白(N蛋白)和229E冠状病毒(HCoV-229E)核衣壳蛋白与细胞延伸因子(EF)-1α的相互作用、翻译抑制效应及与多核细胞形成的关系。方法:构建、表达及纯化SARS-N蛋白和229E-N蛋白的GST融合蛋白,用GST-pull down方法分析其与过表达的EF-1α及内源EF-1α之间的相互作用;构建和表达SARS-N蛋白和229E-N蛋白的GFP融合表达载体,转染293T细胞,通过共聚焦显微镜分析SARS-N蛋白和229E-N蛋白的亚细胞定位及多核细胞的形成;在293T细胞中过表达SARS-N蛋白或229E-N蛋白,通过Co-IP分析其与EF-1α的相互作用。分别在细胞内和体外翻译系统中分析二者抑制报告基因翻译的程度。结果:SARS-N蛋白和229E-N蛋白都定位于细胞质,并不像其他冠状病毒的N蛋白那样定位到细胞核;二者都能诱导形成多核细胞,但229E-N蛋白导致细胞形成多核细胞的时间要晚;二者都能与EF-1α相互作用并且共定位于细胞质,二者都能导致EF-1α形成多聚体;二者在细胞内及细胞外对报告基因都有抑制翻译效应。结论:SARS冠状病毒和229E冠状病毒的核衣壳蛋白均定位于细胞胞质,可与EF-1α相互作用,导致EF-1α形成多聚体,抑制报告基因翻译及导致细胞形成多核。Objective： To analysis the interactions between elongation factor（EF）-1α and the N-proteins of coronavirus, severe acute respiratory syndrome coronavirus（SARS-CoV） N-protein and 229E coronavirus（HCoV-229E） N-protein as examples. Methods： Construction and purification of SARS-N and 229E-N GST fusion proteins, detection of the interactions between EF-1α and the N-proteins with GST-pull down and Co-IP assays. Detection of the colocalization of EF-1α and N-proteins with GFP fusion technology via confocal microscopy, apocyte formation analysis. In vitro and in vivo translational inhibition analysis of N-proteins. Results： SARS-N protein and 229E-N protein localized in cytoplasma instead of localizing in nucleolear as other N proteins of coronaviruses. More over, SARS-N protein and 229E-N protein both could induce multinucleated cells, but the time of 229E-N protein induced multinucleated cells later than SARS-N protein did. SARS-N protein and 229E-N protein can interact with EF-1α in vitro and in vivo, and colocalize in cytoplasma, and in vitro and in vivo inhibit translation of reporter genes, lead to multimer of EF-1α, Conclusious： The SARS-N and 229E-N proteins localize in cytoplasm, interact with EF-1α in vitro and in vivo, more over the SARS-N and 229E-N proteins could lead to EF-1α muhimer and inhibit translation, induce apocyte formation in cells.

关 键 词：SARS冠状病毒 229E冠状病毒 核衣壳蛋白 延伸因子-1α 翻译抑制 多核细胞 多聚体 

分 类 号：Q75[生物学—分子生物学]