pDC515-nr2B重组质粒的构建及其免疫效应  

作　　者：陈建平[1] 王公明[1] 田学愎[1] 杨辉[1] 马国平[1] 田玉科[1] 

机构地区：[1]华中科技大学同济医学院附属同济医院麻醉学教研室,湖北武汉430030

出　　处：《细胞与分子免疫学杂志》2007年第4期306-308,共3页Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology

基　　金：国家自然科学基金资助项目(30471660)

摘　　要：目的构建pDC515-nr2B重组质粒,并研究其在体外表达及体内的免疫效应。方法根据本研究前期从噬菌体随机12肽库中筛选出的NR2B(N-甲基-D-天门冬氨酸受体2B亚基)表位DNA序列,合成两条部分互补的DNA单链,用PCR法合成NR2B表位DNA片段。将NR2B表位编码基因克隆入真核高效表达载体pDC515中,构建pDC515-nr2B重组质粒,经EcoRⅠ和SalⅠ双酶切和DNA测序鉴定其正确性。在293fectinTM介导下将pDC515-nr2B体外转染293细胞后,经RT-PCR及免疫细胞化学染色法鉴定目的基因的表达。将10只SD大鼠随机分为实验组和对照组,实验组用100μg的pDC515-nr2B免疫,0d及7d各肌注1次,对照组于相同时间注射相同剂量的空质粒pDC515。免疫后14d,检测大鼠血清中抗NR2B抗体的水平。结果正确构建了pDC515-nr2B重组质粒。以其转染293细胞后,在转染的293细胞中用RT-PCR可检测到NR2B的mRNA,用免疫细胞化学染色法检测其胞质染色呈阳性。实验组大鼠的血清中可检测到抗NR2B抗体。结论成功地构建pDC515-nr2B重组质粒并可诱导SD大鼠产生相应的抗体。

关 键 词：NR2B基因 pDC515质粒 抗体产生 

分 类 号：R392.12[医药卫生—免疫学]