人源抗NH-LBP Fab抗体的制备和初步鉴定  

作　　者：葛晓冬[1] 邹佳[1] 刘友生[1] 杨艳丽[1] 段光杰[1] 

机构地区：[1]第三军医大学第一附属医院病理科,重庆400038

出　　处：《细胞与分子免疫学杂志》2007年第4期359-362,共4页Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology

基　　金：国家自然科学基金资助项目(30400426);第三军医大学校科研基金(2004年)

摘　　要：目的构建人源抗脂多糖结合蛋白氨基端片段(NH-LBP)Fab抗体的原核表达载体,并制备高稳定性Fab抗体。方法用PCR方法,从可溶性表达抗NH-LBP抗体的重组质粒pComb3H-Fab中扩增出VH链和VL链基因序列,分别构建表达质粒pET-28a(+)-VH和pET-28a(+)-VL,并于工程菌BL21(DE3)star中分别表达及TALON柱芯亲和纯化,将抗体片段VH和VL共同复性,通过二硫键形成Fab抗体,再采用ELISA法初步鉴定其与NH-LBP的结合力。结果扩增出VL链和VH基因片段长约为650bp和700bp,经BL21star表达出相对分子质量(Mr)约为28000和30000的目的蛋白,共同折叠后所获得Fab抗体与NH-LBP具有较高的结合力。结论成功地制备抗NH-LBPFab抗体,为临床抗炎研究提供了条件。

关 键 词：脂多糖结合蛋白氨基端片段(NH-LBP) 人源抗体Fab 高效表达 

分 类 号：R392.11[医药卫生—免疫学]