口蹄疫三价重组鸡痘病毒疫苗分子设计及其构建  

Molecular design and construction of FMD trivalence recombinant fowlpox virus vaccine

作　　者：马鸣潇[1,2,3] 金宁一[1] 刘慧娟[1,3] 沈国顺[1,3] 郑敏[1,3] 金明兰[1,3] 鲁会军[1] 霍晓伟[1,3] 马海利[1,3] 

机构地区：[1]中国人民解放军军事医学科学院军事兽医研究所全军基因工程重点实验室,长春130062 [2]辽宁医学院动物医学院,锦州121001 [3]吉林大学畜牧兽医学院,长春130062

出　　处：《高技术通讯》2007年第3期288-294,共7页Chinese High Technology Letters

基　　金：国家863计划（2001AA213071）资助项目.

摘　　要：针对我国口蹄疫（FMD）流行情况,利用计算机软件模拟分析,构建了口蹄疫病毒（FMDV）复合多表位基因工程疫苗表达盒OAAT。该表达盒以O型、A型FMDV结构蛋白VP1全基因和AsiaⅠ型FMDV2个基因拓扑型的结构蛋白VP1基因上的5个抗原表位基因（其中2个抗原表位来源于FMDVIND63/7株,该毒株与我国新疆分离株属于同一基因拓扑型,其余3个抗原表位来源于FMDVYNBS/58株）作为主要免疫原基因,以非结构蛋白上的2个Th2细胞表位基因及结构蛋白上的1个Th2细胞表位基因作为辅助基因。将构建好的表达盒OAAT和猪IL-18基因分别插入到鸡痘病毒（FPV）表达载体pUTA-16-LacZ复合启动子（ATI-P7.5×20）和单一启动子（P7.5）下游,构建了携带OAAT表达盒和猪IL-18基因的重组鸡痘病毒转移载体质粒pUTAL-OAAT-IL18。应用脂质体转染法,将重组鸡痘病毒转移载体质粒与282E4株FPV共转染鸡胚成纤维细胞（CEF）,经BrdU进行3次加压蚀斑筛选后,以不同代次的细胞mRNA为模板,利用FMDVVP1基因和猪IL-18基因特异引物进行RT-PCR和IFA检测,筛选出OAAT和猪IL-18基因共表达的重组鸡痘病毒rF-PV-OAAT-IL18,该重组鸡痘病毒的构建为新型FMDV活载体疫苗的研究奠定了基础。In this paper, the design and construction of a muhiple-epitope foot and mouth disease virus （FMDV） antigen, designated OAAT, are reported. This recombinant antigen consists of the structural protein VP1 genes from serotypes A and O FMDV, 5 major VP1 immunodominant epitopes from two genotypes of AsiaⅠ serotype, and 3 Th2 epitopes originating from the non-structural protein, 3ABC gene and structural protein VP4 gene. The gene producing OAAT and encoding pig Interleukin-18 （IL-18） are inserted into the fowlpox virus （FPV） expression vector pUTA-16-LacZ to produce recombinant expression plasmid pUTAL-OAAT-IL18, and regulated by ATI-P7.5×20 promoter and P7.5×16 promoter respectively. The recombinant expression plasmids are then co-transected into CEF cells. The recombinant fowlpox viruses- OAAT-IL18 （rFPV-OAAT-IL18） is produced bv throe cyeles with the BrdU and verified by RT-PCR and immunofluorescenee assay （IFA）. The result indicates that the rFPV-OAAT-IL18 strains could correctly express OAAT gene and pig IL-18 gene. This study provides a significant step in the further development of new FMDV vaccines.

关 键 词：复合多表位抗原 表达盒 OAAT口蹄疫病毒 鸡痘病毒 

分 类 号：S858.3[农业科学—临床兽医学]