大豆胰蛋白酶抑制因子酶联免疫吸附测定方法的研究  

A STUDY ON ENZYME LINKED IMMUNOSORBENT ASSAY(ELISA)FOR THE TRYPSIN INHIBITOR OF SOYBEANS

作　　者：张国龙[1] 李德发[1] 

机构地区：[1]中国农业大学动物科技学院,北京100094

出　　处：《动物营养学报》1997年第1期12-20,共9页CHINESE JOURNAL OF ANIMAL NUTRITION

基　　金：国家自然科学基金

摘　　要：本研究以纯化的大豆Kunitz胰蛋白酶抑制因子（KTI）为抗原，对兔子进行35天免疫得到了兔抗KTI血清。分别用辣根过氧化物酶（HRP）标记纯化的抗原与抗体，制备了标记适度的酶标抗原与酶标抗体。建立了3种检测KTI含量的酶联免疫吸附测定（ELISA）方法，即酶标抗原竞争、酶标抗体直接抑制和问接抑制法。结果表明，抑制率在20％～70％范围之内，3种方法得到的标准曲线均呈现良好的线性关系（r＞0．96），且检测下限均低于20ng／ml。根据得到的标准曲线，用酶标抗原竞争ELISA法测定了不同温度热处理的KTI中剩余活性部分的含量。结果表明，ELISA法与酶化学分析法的测定结果高度相关（r＝0．99），同时样品添加的回收率试验误差小于10％。酶标抗原竞争法还被用来测定了不同温度热处理的大豆和熟豆粕、全价饲料等几种大豆产品中KTI的含量。以上结果说明，用ELISA法检测生大豆和不同热加工形式的大豆产品中的剩余KTI含量是可行的。Rabbit anti - Trypsin Inhibitor(TI) serums were separated and antibodies were puri-fied, according to the methods of Saturated Ammonium Sulfate (SAS) Fraction andCaprylic Acid Precipitation respectively before chromatographed through DEAE ~ Celluloseion exchange.The polyacrylamide gelelectrophoresis was established to identify the purified IgG. Theresults expressed that the purity of antibodies is very high after' chromatographed, then thepurified IgG was lyophillized, for the next enzymelabelling. Owing to the short time, theprocedures of making conjugates and develooping ELISA methods to determine the con-cent - ration of TI in soybeans or its processed products such as infant formulas, will begone on with in the future studies.

关 键 词：大豆 胰蛋白酶 抑制因子 酶联免疫 吸附测定 

分 类 号：TS214.2[轻工技术与工程—粮食、油脂及植物蛋白工程]