串珠镰孢霉D-泛解酸内酯水解酶基因的克隆及在大肠杆菌中的表达  

作　　者：柳志强[1] 孙志浩[1,2] 

机构地区：[1]江南大学生物工程学院生物催化研究室,无锡214036 [2]工业生物技术教育部重点实验室,无锡214036

出　　处：《中国生物学文摘》2007年第5期23-23,共1页Chinese Biological Abstracts

摘　　要：利用D-泛解酸内酯水解酶N末端序列，并根据NCBI中公布的D-泛解酸内酯水解酶cDNA序列设计了一个特异引物，该引物结合Oligo（dT）15，以串珠镰孢霉（Fusarium mniliforme）CGMCC 0536mRNA反转录得到的总cDNA为模板进行扩增，获得约1．5kb左右的片段，将其克隆到T载体上进行测序，对测得的序列进行分析，重新设计了一对引物，并在引物两端分别加上限制酶EcoRⅠ和SalⅠ的识别位点序列，利用热启动PCR成功地扩增出了D-泛解酸内酯水解酶基因，基因片段长度为1146bp，该序列同来源于尖镰孢霉菌（F．oxysporum）AKU3702菌株的编码D-泛解酸内酯水解酶cDNA结构基因的同源性为90．06％。将所得片段定向克隆到pTrc99a载体中，转化至JM109感受态细胞，筛选出了阳性克隆。经IPTG诱导阳性菌，进行SDS—PAGE电泳，检测出在约40kD处有一蛋白表达带。对两株重组基因工程菌的比活力进行测定，结果分别为37u和41U。

关 键 词：串珠镰孢霉菌 D-泛解酸内酯水解酶基因 CDNA 克隆 原核表达 

分 类 号：Q949.320.6[生物学—植物学]