Smads转录激活检测系统的建立  

Construction of Smads Transcriptional Activation System

作　　者：郭宁[1] 宗利丽[2] 严景华[1] 丁丽华[1] 朱建华[3] 叶棋浓[1] 

机构地区：[1]军事医学科学院生物工程研究所 [2]南方医科大学珠江医院妇产科,广东广州510280 [3]解放军总医院第一附属医院,北京100037

出　　处：《生物技术通讯》2007年第2期189-192,共4页Letters in Biotechnology

基　　金：国家自然科学基金项目(30625035;30530320;30470378);国家重点基础研究发展规划项目(2006CB0F0300)

摘　　要：目的:构建Smads转录激活检测系统,以研究Smad2、Smad3、Smad4的功能。方法:将Smad2/3/4编码序列以正确读码框与pRC-lac载体中的Lac阻遏蛋白编码序列融合构建重组质粒,将重组质粒与受Lac操纵子调控的荧光素酶报告基因质粒共转染293T细胞,检测荧光素酶活性,其活性的强弱即代表转录活性的强弱。结果:Smad2和Smad3具有较强的依赖于TGF-β1的转录活性;Smad4全长没有检测到转录活性,但其SAD结构域有不依赖于TGF-β1的转录活性,MH2结构域有依赖于TGF-β1的转录活性。结论:构建的Smads转录激活检测系统能有效地用于Smad2、Smad3、Smad4功能的研究。Objective： To construct Smads transcriptional activation system for studying the function of Smads. Method： The corresponding cDNA coding sequence of Smad2/3/4 was inserted to the pRC-lac vector which contains Lac repressor coding sequence. The recombinants were transfected into 293T cells with plac-LUC reporter, and then the luciferase activity was detected. Results： Smad2 and Smad3 had TGF-β1-induced transcriptional activity. Full-length Smad4 did not have transcriptional activity, but Smad4 SAD and MH2 domains had TGF-β1-independent and TGF-β1-dependent transcriptional activities, respectively. Conclusion： Smads transcriptional activation system was successfully constructed. This will provide a good tool for studying on function of TGF-β1 signaling pathway.

关 键 词：SMADS 转录激活 荧光素酶活性 

分 类 号：Q78[生物学—分子生物学]