谷胱甘肽硫转移酶与hEGF在大肠杆菌中的融合表达及活性研究  

Expression and activity study of GST-hEGF fusion protein in E. coli

作　　者：吴方丽[1] 金伟波[1] 王保莉[1] 

机构地区：[1]西北农林科技大学生命科学学院

出　　处：《西北农林科技大学学报（自然科学版）》2007年第8期175-179,共5页Journal of Northwest A&F University(Natural Science Edition)

基　　金：国家"863"高技术研究与发展计划项目(2001AA213081);西北农林科技大学重点专题基金项目

摘　　要：为了得到具有生物学活性的人表皮生长因子(hEGF),将含有人表皮生长因子基因的原核表达载体pGEX-4t-1(+)-hEGF转化入BL21-CodonPlusTM-RP表达宿主菌进行大量表达,SDS-PAGE分析表明,融合蛋白主要以包涵体的形式存在。收集包涵体,用氧化复性的方法,加入还原型的谷胱甘肽进行复性,之后通过GlutathioneSepharoseTM4B纯化柱,分离纯化得到复性的融合蛋白。以兔抗人EGF单克隆抗体为一抗,进行Western blotting鉴定,证明分离纯化得到的融合蛋白含有目的蛋白hEGF。最后对复性的融合蛋白进行了活性分析,表明该融合蛋白具有良好的hEGF生物学活性。The prokaryotic expression vector pGEX-4t-1（＋）-hEGF with the biological activity of human epidermal growth factor （hEGF） was cloned and expressed in the bacteria BL21-CodonPlus^TM-RP. The expression product was proved mainly in inclusion bodies by SDS-PAGE. The inclusion bodies were collected,then renaturated by adding the reduced glutathione and purified with Glutathione Sepharose^TM 4B. Further results in Western blotting test showed that the purified fusion protein contained hEGF,which proved the fusion protein had good biological activity.

关 键 词：表皮生长因子 PGEX-4T-1 BL21-CodonPlusTM-RP 分离纯化 生物学活性 

分 类 号：Q813.2[生物学—生物工程]