寡聚脱氧核苷酸介导的体外多点定位突变——五点定位突变法改造枯草杆菌蛋白酶E基因  被引量:3

OLIGONUCLEOTIDE DIRECTED MULTI POINT SITE SPECIFIC MUTAGENESIS ——Five point Site specific Mutagenesis for Modifying Subtilisin E Gene

在线阅读下载全文

作  者:谢毅[1,2] 肖谷田[1,2] 王顺德 孙筱清[1,2] 张婕 徐万祥 吴小舟 

机构地区:[1]复旦大学遗传工程国家重点实验室 [2]上海市计划生育科学研究所

出  处:《武汉大学学报(自然科学版)》1997年第2期227-232,共6页Journal of Wuhan University(Natural Science Edition)

基  金:"联合国工业发展组织"(UNIDO)资助

摘  要:用5个化学合成的寡聚脱氧核苷酸片段作为诱变引物,对枯草杆菌蛋白酶E基因(AprE)同时进行体外诱变.转化子经打点杂交及温度梯度洗膜法筛选出了若干在5个预定位点同时突变了的突变子,其突变效率达到50%.同时还得到了1个四点突变的突变子.突变子经DNA测序分析。This article represented a simple and efficient method for multi point site specific mutagenesis. The procedure includes: the annealing of a single stranded uracil containing DNA template with five oligonucleotide fragments at a time,in vitro synthesis and ligation ,transforming JM109 of E.coli.,screening mutants by washing the filter at an increasing temprature. Using the approach, we have succeeded in obtaining several five point mutants in subti lisin E gene.A four point mutant was obtained at the same time. The result was confirmed by DNA sequenceing.

关 键 词:定点突变 枯草杆菌 蛋白酶 寡聚脱氧核苷酸 诱变 

分 类 号:Q319.33[生物学—遗传学]

 

参考文献:

正在载入数据...

 

二级参考文献:

正在载入数据...

 

耦合文献:

正在载入数据...

 

引证文献:

正在载入数据...

 

二级引证文献:

正在载入数据...

 

同被引文献:

正在载入数据...

 

相关期刊文献:

正在载入数据...

相关的主题
相关的作者对象
相关的机构对象