TAT-EGFP融合蛋白对小鼠生物膜穿透性的研究  

Study on the TAT-EGFP Fusion Protein Penetrability into Biomembranes in Mice

作　　者：严世荣[1] 闫莹[1] 孙军[1] 宗义强[1] 王小波[1] 屈伸[1] 

机构地区：[1]华中科技大学同济医学院生化与分子生物学系

出　　处：《药物生物技术》2007年第5期324-327,共4页Pharmaceutical Biotechnology

基　　金：湖北省教育厅资助。项目编号:Q200524001

摘　　要：探讨TAT-穿透生物膜的效应,为临床上应用生物大分子药物进入组织细胞内发挥治疗作用提供实验基础。按分子克隆常规操作构建pET28a-TAT-EGFP重组表达载体,转导入宿主菌BL21后用IPTG诱导TAT-EGFP融合蛋白表达,经镍金属鳌合层析柱纯化获得融合蛋白。通过腹腔注射到小鼠体内,观察TAT-EGFP融合蛋白穿透各组织生物膜及达到各组织的时间、浓度。腹腔注射TAT-EGFP,30 min后各主要脏器经检测均有荧光出现,4 h各组织荧光强度达最大值。证明在生物大分子的N-末端加上TAT具有穿透力的蛋白转导区肽段形成的融合蛋白可有效穿透细胞膜到达各组织。To investigate the effects of TAT -EGFP fusion protein, penetrating into biomembrane was construted the recombinant of pET28a-TAT-EGFP, induced by IPTG and the purified protein was obtained by Ni^2＋ affinity gel column chromatography. The penetrability of TAT-EGFP fusion protein was under a fluorescence microscope after intraperitoneal injection of the recombinant protein. TAT-EGFP quikly reached all tissues in 30 rain and reached maximum intracelular concentrations at 4 hour after intraperitoneal injection. TAT - EGFP fusion proteins have the effects of penetrating into all tissues in mice.

关 键 词：增强型绿色荧光蛋白 融合蛋白 蛋白转导结构域 

分 类 号：Q7[生物学—分子生物学]