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机构地区:[1]广州医学院第一附属医院,广东广州510120
出 处:《中国热带医学》2007年第12期2180-2183,共4页China Tropical Medicine
基 金:广东省自然科学基金(编号:05002318);广东省科技厅项目(编号:63077);广州市科技局(编号:2007J1-C0141);广州市卫生局(编号:2005-BY-130);广州市医药卫生科技(编号:2007-YB-156)
摘 要:目的对肺炎克雷伯菌所产CTX-M-3型超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)进行基因克隆和重组表达,探讨其特性。方法以产CTX-M-3型超广谱β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌49号菌总基因组DNA为模板,PCR扩增CTX-M-3,将其克隆入pGEM-T载体后测定该核苷酸序列,再将CTX-M-3基因克隆到pBV220/DH5α系统进行重组,重组菌经42℃热诱导,SDS-PAGE电泳鉴定酶蛋白的表达。结果PCR扩增出大小为876bp的基因片段,与GenBank上同类酶的基因序列同源性为100%。大肠杆菌DH5α转化pBV220/CTX-M-3重组质粒后,ESBLs试验为阳性,药敏试验结果与原菌株相比耐药性下降。此基因能在大肠埃希菌中大量表达,SDS-PAGE电泳显示,蛋白分子质量大约为31KD。结论成功表达重组的CTX-M-3型酶,为进一步做酶动力学及酶的其他分子生物学特性研究奠定基础。Objective To carry out sequence analysis, prokaryotic expression of CTX - M - 3 extended - spectrum β - laetamase from KlebsieUa pneumoniae. Methods The bla CTX - M - 3 was amplified by PCR and sequeneed after being subeloned in pGEM -T veetor. And then the bla CTX- M- 3 was eloned into pBV220 veetor ,and expressed in E. coli DH5α. Results Sequenee of bla CTX - M - 3 shared 100% amino aeid identity with bla CTX - M - 3 that already registered in GenBank. The test of ESBLs in the reeombinant strain was positive, the reeombinant strain's resistanee to antiblofie was deereased eompared with strain 49.The blaCTX- M - 3 ean be expressed in E. coli DH5α , its moleeular weight is about 31KD. Conclusion The sueeessful prokaryotle expression of bla CTX - M - 3 lays a good foundation for enzymologieal and moleeular biologieal study of CTX - M - 3 extended - speetrumβ - laetamase.
分 类 号:R378.99[医药卫生—病原生物学]
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