重组杆状病毒Bacmid-HER2胞外段基因的构建及鉴定  

作　　者：陈亚静[1] 魏映辉[2] 吴秀丽[2] 王莉[1] 王丽颖[2] 于永利[1] 

机构地区：[1]吉林大学基础医学院免疫学教研室,吉林长春130021 [2]吉林大学基础医学院分子生物学教研室,吉林长春130021

出　　处：《细胞与分子免疫学杂志》2007年第12期1183-1185,共3页Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology

基　　金：国家高技术研究发展计划(863)资助项目(2002AA214141)

摘　　要：目的:克隆人表皮生长因子受体2胞外段基因(HER2-ECD)的cDNA,构建重组杆状病毒Bacmid-HER2-ECD。方法:从Her2高表达的人乳腺癌细胞系SK-BR-3中提取总RNA,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增HER2ECD基因cDNA。利用T/A克隆连接法,首先构建pMD18-T-HER2-ECD重组质粒,并对基因进行测序。然后通过酶切连接构建供体质粒pFastBac-HER2-ECD。将供体质粒转化入DH10Bac菌与空Bacmid发生转座,得到重组Bacmid-HER2ECD。对重组Bacmid进行PCR法和点杂交鉴定。结果:pMD18-T-HER2ECD内插入片段序列与实际序列一致;pFastBac-HER2ECD经酶切鉴定与预期结果一致。重组Bacmid-HER2ECD通过PCR法能得到目的大小片段,并且能够与特异性探针发生结合。结论:成功地完成了HER2ECD基因的克隆和重组Bac-mid-HER2ECD的构建。

关 键 词：HER2ECD 基因克隆 昆虫杆状病毒表达系统 

分 类 号：R392.11[医药卫生—免疫学]