人HSV-1 UL40基因重组质粒的构建及其在siRNA筛选中的应用  

Construction of human HSV-1 UL40 gene recombinant and its application in siRNA screening

作　　者：任哲[1] 张美英[2] 王一飞[2] 朱钦昌[2] 张春龙[2] 陆大祥[3] 胡巢凤[3] 李久香[3] 张佩琢 杨志荣[1] 

机构地区：[1]四川大学生命科学学院,四川成都610000 [2]暨南大学生物医药研究与开发基地,广东广州510632 [3]暨南大学医学院,广东广州510632 [4]上海吉玛制药技术有限公司,上海201203

出　　处：《中国病理生理杂志》2007年第12期2444-2447,共4页Chinese Journal of Pathophysiology

基　　金：广东省工业攻关计划项目(2005A10904001);暨南大学重点实验室开放基金资助项目(No2005)

摘　　要：目的:快速筛选出高效沉默人HSV-1 UL40基因的siRNA,为进一步应用RNA干扰的相关研究奠定基础。方法:应用RT-PCR扩增人HSV-1F株UL40基因,将其连接到pEGFP-N1构建pEGFP-N1-UL40融合蛋白表达质粒。将化学合成的针对UL40基因的siRNA与重组质粒共转染Vero细胞,通过观察绿色荧光蛋白报告基因的表达筛选高效沉默人HSV-1 UL40基因的siRNA。结果:倒置荧光显微镜观察发现设计的4对siRNA中siRNA3和siRNA4能明显降低绿色荧光蛋白的表达,流式细胞仪检测证明siRNA3和siRNA4对目的基因沉默效率分别达到76.99%和84.00%。结论:成功构建了人HSV-1 UL40基因融合表达载体pEGFP-N1-UL40,并利用该载体筛选出2对高效沉默人HSV-1 UL40基因的siRNA。AIM： To construct the recombinant of human herpesvirusⅠ （ HSV - 1 ） UL40 gene and to screen siRNAs of silencing efficiently human HSV - 1 UL40 gene expression. METHODS ： The recombinant UL40 - EGFP plas- mid （pEGFP-N1 -UL40） was constructed by cloning the UL40 gene into pEGFP- N1. siRNA target UL40 gene and pEGFP - N1 - UL40 were cotransfected into Vero cells. The effects of RNAi were detected by green fluorescence signals. RESULTS ： siRNA3, siRNA4 reduced prominently the expression of UL40 gene. The silence efficiency was 76.99% and 84.00% respectively. CONCLUSION： We succeed in construction of the pEGFP - N1 - UL40 recombinant, and screen out siRNA3 and siRNA4 of silencing efficiently human HSV - 1 UL40 gene expression.

关 键 词：疱疹病毒Ⅰ型 人 基因 UL40 SIRNA 

分 类 号：Q78[生物学—分子生物学]