携带SARS-CoV刺突蛋白N端片段重组腺病毒的构建  

作　　者：刘然义[1] 黄必军[1] 黄嘉凌[1] 吴立志[1] 张如华[1] 陈汉奎[1] 曾益新[1] 黄文林[1] 

机构地区：[1]中山大学肿瘤防治中心,广东广州510060

出　　处：《中山大学学报（医学科学版）》2005年第B03期32-34,共3页Journal of Sun Yat-Sen University:Medical Sciences

基　　金：国家"973计划"SARS 研究专项(2003CB514107);教育部抗非典科技攻关项目(教技司【2003】64号);广东省抗非典科技攻关项目(粤科社字【2003】263号);广州市科技攻关项目(2003Z3-E0451)

摘　　要：【目的】构建携带 SARS 冠状病毒刺突蛋白 N 端基因片段的重组腺病毒。【方法】从 SARS 病毒 cDNA 扩增刺突蛋白 N 端基因片段(-45～1469nt,截短的 S1区,S_N),插入腺病毒穿梭质粒 pShuttle,通过体外连接法构建重组腺病毒Ad-S_N。用 Ad-S_N 感染 Vero-E6细胞,通过 RT-PCR 和 Western blot 法检测 S_N 的表达。【结果】克隆的 S_N 基因序列与文献报道基本一致;Ad-S_N 基因组结构与预期一致。在 Ad-S_N 感染的 Vero-E6细胞中存在 S_N 基因的转录和分泌型 S_N 蛋白的表达。【结论】体外连接法是一种简便易行的重组腺病毒载体构建方法;重组腺病毒 Ad-S_N 能正确表达分泌型 S_N 蛋白,可用于诱导抗 SARS 免疫的动物实验研究。

关 键 词：SARS病毒 刺突蛋白 体外连接法 疫苗/腺病毒载体 

分 类 号：R373.9[医药卫生—病原生物学] R563.3[医药卫生—基础医学]