人血管内皮生长因子165基因腺病毒载体的构建及其在C17.2神经干细胞的表达  

作　　者：沈庆煜[1] 黎祥喷[1] 陶恩祥[1] 肖颂华[1] 王莉梅[1] 邢诒刚[1] 

机构地区：[1]中山大学附属第二医院神经科,广东广州510120

出　　处：《中山大学学报（医学科学版）》2005年第B03期152-155,共4页Journal of Sun Yat-Sen University:Medical Sciences

基　　金：广东省卫生厅科研基金(B2004047)

摘　　要：【目的】构建含有人血管内皮生长因子165(VEGF_(165))基因的重组腺病毒载体并观察其在 C17.2神经干细胞的表达,为下一步脑缺血的转基因细胞移植治疗提供基础。【方法】将 VEGF_(165)基因克隆至腺病毒穿梭质粒 pAdTrackCMV,获得重组质粒 pAdTrack VEGF_(165)。经酶切线性化后,与腺病毒骨架质粒 pAdEasy 共同转染大肠杆菌 BJ5183同源重组获得重组腺病毒质粒,将线性化的重组腺病毒质粒转染293细胞包装获得有感染能力但复制缺陷的重组腺病毒 pAdCMV VEGF_(165),转化体外培养的 C17.2神经干细胞。通过 RT-PCR、原位杂交、免疫组化、Western blot 法检测其在 C17.2神经干细胞中的表达。【结果】重组腺病毒 AdCMV VEGF_(165)在293细胞中包装成功,病毒滴度达2×10^(11)efu/mL。病毒上清液经 ELISA 检测VEGF_(165)表达的量为(1135±138)ng/L。重组腺病毒转染神经干细胞后有稳定表达。【结论】成功构建 pAd VEGF_(165)重组腺病毒,获得了稳定表达 VEGF_(165)的神经干细胞克隆,为下一步脑缺血的转基因细胞移植治疗提供了基础。

关 键 词：血管内皮生长因子 腺病毒科 神经干细胞 

分 类 号：Q5[生物学—生物化学]