人IL-6 mRNA的实时定量检测法  

The method of real-time quantifying human IL-6 mRNA

作　　者：邹立林[1] 郑晓群[2] 左江成[1] 王震[1] 季敬璋[1] 吕建新[1] 

机构地区：[1]温州医学院浙江省医学遗传学重点实验室,浙江温州325035 [2]温州医学院附属第二医院检验科,浙江温州325027

出　　处：《中国病理生理杂志》2008年第1期206-208,共3页Chinese Journal of Pathophysiology

基　　金：浙江省教育厅基金资助项目(No.SJY03006)

摘　　要：目的:建立TaqMan-MGB技术实时定量检测人IL-6 mRNA的方法,并用于检测人外周血单个核细胞在牛膝多糖诱导下IL-6 mRNA的表达。方法:(1)抽取人外周静脉血,EDTA抗凝,用淋巴细胞分离液分离外周血单个核细胞,用Trizol裂解液提取总RNA,将总RNA逆转录为cDNA,PCR扩增IL-6后纯化PCR产物,与pMD 18-T载体进行连接,转化宿主菌DH-5α。提取重组质粒DNA,作为实时荧光定量检测的标准品。建立TaqMan-MGB技术实时定量检测IL-6 mRNA的方法。(2)终浓度分别为0、100、200、400、800和1600mg/L的牛膝多糖作用于人外周血单个核细胞,定量检测IL-6 mRNA的表达。结果:(1)酶切分析、PCR扩增以及测序结果均证实IL-6 cDNA成功重组到pMD 18-T载体上。(2)TaqMan-MGB技术检测IL-6 mRNA线性范围广;灵敏度高;特异性好;重复性好。(3)牛膝多糖作用于人外周血单个核细胞后IL-6mRNA表达增高。结论:TaqMan-MGB技术能较为精确地定量IL-6 mRNA。

关 键 词：白细胞介素6 RNA 信使 逆转录聚合酶链反应 TaqMan—MGB技术 牛膝多糖 

分 类 号：R392.11[医药卫生—免疫学]