CXCL16基因与红色荧光蛋白pDsRed2-N1融合基因表达载体的构建  

Construction of CXCL16/RFP fusion gene expression vector

作　　者：刘厚佳[1] 郭献灵[2] 杨阳[2] 芮耀诚[3] 卫立辛[2] 吴孟超[2] 张黎[2] 

机构地区：[1]第二军医大学附属长海医院,200433 [2]第二军医大学附属东方肝胆外科医院,200438 [3]第二军医大学药学院药理学教研室,200433

出　　处：《中国肿瘤生物治疗杂志》2007年第6期578-581,共4页Chinese Journal of Cancer Biotherapy

基　　金：国家自然科学基金资助项目(No.30500615);军队"十五"医学科研课题资助项目(No.04A-8);上海市卫生局青年课题资助项目(No.2004-55-94)~~

摘　　要：目的:构建人趋化因子配体16(CXC ligand 16,CXCL16)与增强型红色荧光蛋白(red fluorescent protein,RFP)的融合基因表达载体pDsRed2-N1/CXCL16,使CXCL16-RFP融合蛋白在人293T细胞中稳定表达。方法:针对CXCL16基因设计引物,扩增人CXCL16 cDNA,退火后插入含有RFP的表达载体pDsRed2-N1。测序正确的CXCL16和RFP的融合基因表达载体pDsRed2-N1/CXCL16,经脂质体转染人293T细胞株,G418筛选获得稳定转染的细胞株。荧光显微镜观察细胞转染情况,Western blotting比较转染前后293T细胞中CXCL16蛋白的表达变化。结果:经转化细菌、抽提质粒、酶切鉴定和DNA序列分析证实,CXCL16基因已正确插入pDsRed2-N1中RFP基因的上游,获得融合基因表达载体pDsRed2-N1/CXCL16。空载体pDsRed2-N1和融合基因表达载体pDsRed2-N1/CXCL16经脂质体转染人293T细胞后,在荧光显微镜下可观察到表达RFP的细胞发出红色荧光,转染效率分别可达95%和85%。pDsRed2-N1/CXCL16转染293T细胞后,CXCL16蛋白的表达水平显著上调。结论:成功构建的pDsRed2-N1/CXCL16融合基因表达载体可在293T细胞中稳定表达CXCL16蛋白,为进一步研究CXCL16在细胞增殖调控中的作用奠定了基础。

关 键 词：趋化因子配体16 清道夫受体 重组融合基因 表达载体 

分 类 号：Q782[生物学—分子生物学]