枯草杆菌蛋白酶E基因多位点定点突变库的构建及其筛选  

作　　者：谢毅[1] 肖谷田[1] 张婕[1] 孙筱清 吴小舟 王启松[1] 陈小央 

机构地区：[1]复旦大学遗传研究所遗传工程国家重点实验室,上海200433 [2]浙江大学生物系

出　　处：《中国科学（C辑）》1997年第2期97-102,共6页Science in China(Series C)

基　　金：联合国工业发展组织(UNIDO)基金资助项目

摘　　要：利用化学合成的15个寡聚核苷酸片段作为诱变引物,同时对枯草杆菌蛋白酶E(Subtilisin E或Apr E)基因进行体外突变,获得了合全部突变位点各种随机组合突变的突变库,通过点杂交法和DNA序列分析肯定了该突变库的可靠性.从突变库中选择一单点突变(Met222Ala)和3点突变(Asn76Asp/Asn109Ser/Ile205Cys)的基因进行克隆、表达和产物的酶学性质研究,发现其抗氧化性和热稳定性分别比野生型的有显著提高,与文献报道的一致.表明了该突变库在枯草杆菌蛋白酶工程研究中的应用价值.

关 键 词：蛋白质工程 枯草杆菌 蛋白酶E基因 点突变库 

分 类 号：Q783[生物学—分子生物学] Q939.124