靶向bcl-2基因转录shRNA重组质粒的构建和筛选  

作　　者：孙桦[1] 李光明[1] 刘博伟[1] 胡俊杰[1] 李定国[1] 

机构地区：[1]上海交通大学医学院新华医院消化内科,上海200092

出　　处：《上海交通大学学报（医学版）》2008年第2期224-227,共4页Journal of Shanghai Jiao tong University:Medical Science

摘　　要：目的构建能高效抑制肝星状细胞(HSCs)bcl-2表达的小发夹RNA(shRNA)重组质粒。方法利用RNA干扰技术,设计有小发夹结构的3条DNA序列,经退火形成互补双链,克隆至转录载体psiRNA-hH1neo上构建重组质粒,予以酶切和测序鉴定。重组质粒转染HSC-T6细胞株,运用实时荧光定量PCR和Western blotting进行筛选鉴定。结果酶切及测序鉴定表明,成功构建重组质粒shRNA1、shRNA2和shRNA3。实时荧光定量PCR和Western blotting检测结果显示,shRNA1和shRNA2转染后显著抑制HSC-T6中bcl-2mRNA和蛋白表达(P<0.05),其中siRNA1的bcl-2表达抑制效率>80%。结论构建的重组质粒shRNA1能有效抑制HSCs中bcl-2的表达。实验为进一步探索肝纤维化基因治疗的新途径奠定了基础。

关 键 词：RNA干扰 BCL-2 重组质粒 肝星状细胞 

分 类 号：R346[医药卫生—基础医学] Q786[生物学—分子生物学]