流式细胞仪富集大鼠A1-A4型精原干细胞  

Enrichment of Type A1-A4 Spermatogonia by Flow Cytometry

作　　者：白杨[1] 叶哲伟[2] 曾甫清[1] 

机构地区：[1]华中科技大学同济医学院附属协和医院泌尿外科,湖北武汉430022 [2]华中科技大学同济医学院附属协和医院骨科,湖北武汉430022

出　　处：《中华男科学杂志》2008年第1期3-6,共4页National Journal of Andrology

基　　金：国家自然科学基金项目(30371424)

摘　　要：目的：探讨A型精原干细胞的A1-A4亚型细胞的分离纯化方法。方法：先使用不连续密度梯度法分离A型精原细胞，再经流式细胞分选技术分选有干细胞因子受体（c-kit）表达的亚型细胞。并采用免疫组化检测c-kit在睾丸中的表达，电镜下观察分选后细胞超微结构。结果：经密度梯度分离后的精原细胞内含c-kit阳性细胞比例为（18.65±1.69）％，未经密度梯度分离的睾丸细胞内含c-kit阳性细胞比例为（3.16±0.84）％，两者比较差异有显著性（P〈0.01）；c-kit阳性细胞经流式细胞术分选，阳性细胞回收率（65.90±1.24）％，活性（85.60±1.14）％。结论：以c-kit为标记物，经不连续密度梯度分离初步纯化后，使用流式细胞分选技术能有效分离A型精原干细胞亚型。Objective： To explore a method to isolate and purify the subtype of type A spermatogonial stem cells （SSCs）. Methods ： We isolated spermatogonia by discontinuous density gradient centrifugation, sorted c-kit-expressed cells with the fluorescence-acti- vated cell sorter （FACS）, observed their uhrastructure by electron microscope, and performed immunohistochemistry to determine the expression of c-kit in the testis. Results ： The c-kit positive cells constituted （ 18.65±1.69） % of the testis cells that were isolated by density gradient centrifugation, but made up only （3.16±0.84） % of those that were not （ P 〈 0.01 ）. The rates of recovery and viability of the c-kit positive cells sorted by FACS were （65.90± 1.24） % and （ 85.60±1.14 ） %, respectively. Conclusion ： With c-kit as the marker, FACS can effectively isolate and purify the subtype of SSCs after preliminarily purified by discontinuous density gradient centrifugation.

关 键 词：精原干细胞 亚型 流式细胞术 大鼠 

分 类 号：Q954.4-3[生物学—动物学]