不同的固定及渗透方法对小鼠卵母细胞免疫荧光染色的影响  

作　　者：谢颖颖[1] 邵华[2] 郑俊克[3] 马恒东[1] 李瑞珍[3] 

机构地区：[1]四川农业大学动物科技学院畜禽品种资源发掘与利用省重点实验室,雅安625014 [2]上海交通大学医学院新华医院泌尿外科组织工程研究室,上海200092 [3]上海交通大学医学院新华医院发育生物学研究中心,上海200092

出　　处：《上海交通大学学报（医学版）》2008年第3期349-352,共4页Journal of Shanghai Jiao tong University:Medical Science

基　　金：国家重点基础研究发展规划项目(“九七三”计划)(001CB509903,001CB509904)~~

摘　　要：目的探索有效的染色前固定及渗透卵母细胞的方法,以提高小鼠卵母细胞免疫荧光染色的效率。方法采用4种不同的固定及渗透方法处理小鼠卵母细胞:①方案A:先用4%多聚甲醛(PFA)固定1 h,再用0.5%Triton X-100穿透10 min;②方案B:先用0.5%Triton X-100穿透10 min,再用4%PFA固定1 h;③方案C:用1%PFA+0.5%Triton X-100同时固定与穿透1 h;④方案D:用-20℃预冷甲醇固定15 min。分析10种核蛋白(TFⅡA、TFⅡB、TAF1、TAF4、polⅡ、BRF1、MeCP2、MBD2ab、HP1α及HP1β)在小鼠卵母细胞中的免疫荧光染色效果。结果只有方案C能够完全检测出这10种蛋白质。结论用1%PFA+0.5%Triton X-100同时固定与穿透1 h,可以在小鼠卵母细胞形态保持良好的同时检测出更多的蛋白质。

关 键 词：固定 渗透 卵母细胞 免疫荧光染色 激光扫描共聚焦显微镜 小鼠 

分 类 号：Q2-3[生物学—细胞生物学]