蛋氨酸裂解酶基因在大肠杆菌中的高效表达  

High expression of the L-Methionine γ-lyase gene in E. coli

作　　者：马百坤[1] 王红兵[2] 

机构地区：[1]南京军区南京总医院解放军临床检验医学研究所,江苏南京210002 [2]成都铁路局疾病预防控制中心,四川成都610082

出　　处：《医学研究生学报》2008年第4期353-355,359,共4页Journal of Medical Postgraduates

基　　金：江苏省医学重点学科基金资助(批准号:苏卫科教[2001]34)

摘　　要：目的:使来源于人阴道毛滴虫的蛋氨酸裂解酶基因在大肠杆菌中高效表达;纯化表达产物获得重组蛋氨酸裂解酶。方法:用蛋氨酸裂解酶基因片段克隆至pGEX4T-2,转化大肠杆菌,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导下体外表达重组蛋白,亲和层析纯化重组蛋白。结果:表达产物经SDS-PAGE,显示在相对分子质量68000处出现高浓度的GST融合蛋白,其相对分子质量与预期的GST-重组蛋氨酸裂解酶大小相符;薄层扫描显示重组蛋白占总菌量的34%。结论:人阴道毛滴虫蛋氨酸裂解酶基因在大肠杆菌中成功地获得高效表达。Objective： To identify and highly express the L-Methionine γ-lyase gene from Trichomonas vaginalis （TVMGL）. Methods： The TVMGL gene was cloned into pGEX 4T-2, the recombinant protein expressed in E. coli DHSctand confirmed by SDS-PAGE. Results： Denaturing SDS-PAGE analysis confirmed the predicted size of the fusion protein （GST-TVMGL, 68 000） and showed high purity after subsequent affinity chromatography on Glutathione sepharose 4B. The target proteins amounted to 34% of the total bacteria proteins. Conclusion ： The L-Methionine γ-lyase gene was highly expressed in E. coll.

关 键 词：蛋氨酸裂解酶 基因克隆 逆转录PCR 体外表达 蛋白纯化 

分 类 号：Q786[生物学—分子生物学]