马γ-干扰素双抗体夹心ELISA检测方法的建立  

Development of sandwich ELISA for equine interferon-gamma detection

作　　者：白宇[1] 童铁钢[1] 张维军[1] 徐树兰[1] 王群[1] 刘光亮[1] 吴东来[1] 

机构地区：[1]中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室,黑龙江哈尔滨150001

出　　处：《细胞与分子免疫学杂志》2008年第5期464-466,共3页Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology

基　　金：国家高技术研究发展计划(863)资助项目(2006AA10A203);黑龙江省自然科学基金重点资助项目(ZJN-0602-01)

摘　　要：目的:建立检测马γ-干扰素的双抗体夹心ELISA,为马传染病的免疫学研究提供新方法。方法:将识别不同表位的抗马γ-干扰素的2株单克隆抗体(mAb,A5和SB10)纯化后,利用生物素标记试剂盒对其中1株纯化的mAb(SB10)进行标记,通过对重组马IFN-γ进行ELISA检测来建立马γ-干扰素双抗体夹心ELISA。结果:经过方阵滴定实验确定捕获抗体的最佳浓度为1mg/L,检测抗体的工作效价为1∶1000。利用建立的方法对不同稀释度的重组马γ-干扰素和丝裂原刺激的马外周血单核细胞培养上清进行检测。结论:此方法检测敏感度达到1μg/L,特异性良好,为马的细胞免疫学研究提供了方法,并为建立马γ-干扰素ELISPOT检测方法奠定了基础。AIM： To develop a quantitaive ELISA by measuring interferon （IFN-γ） of equine lymphocytes, METHODS： Sandwich ELISA for equine IFN-γ was developed using mAb A5 as a capture antibody and biotinylated mAb SB10 as a detection antibody. RESULTS： The detection limit of the sandwich ELISA for equine IFN-γ was 1μg/L and did not show cress-reactivity with recombinant equine IL-18. Equine IFN-γ was detected by ELISA in culture medium of the peripheral blood mononuclear cells （PBMCs） stimulated with ConA or PMA/Ionomycin. CONCLUSION： This method can be used to help understand the role of this cytokine in various equine diseases and develop specific cell-mediated immunity assay.

关 键 词：马γ-干扰素 夹心ELISA 

分 类 号：R392.33[医药卫生—免疫学]