突变型人胰岛素原基因的克隆及其腺病毒载体的构建  

作　　者：石琳[1] 陈振萍[1] 袁向飞[1] 杨少光[1] 张宇光[1] 韩忠朝[1] 

机构地区：[1]中国医学科学院中国协和医科大学血液学研究所血液病医院,天津300020

出　　处：《细胞与分子免疫学杂志》2008年第5期529-531,共3页Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology

摘　　要：目的:构建含有定点突变的人胰岛素原基因的腺病毒表达载体。方法:首先利用RT-PCR方法从正常流产胎儿胰腺组织获取野生型人胰岛素原cDNA;然后通过重叠延伸PCR方法在人胰岛素原cDNA上产生2个突变位点,使突变的cDNA编码的蛋白质含弗林蛋白酶的识别位点,该突变型胰岛素原cDNA片段命名为INS-M2;最后将INS-M2亚克隆至腺病毒载体系统的穿梭载体的多克隆位点上,并与骨架载体共转染至细菌内,通过细菌内同源重组得到重组载体。结果:Hind Ⅲ和Xho I酶切、Pac I酶切及测序均证实载体pAd-INS-M2构建成功。结论:构建的含定点突变人胰岛素原基因腺病毒载体pAd-INS-M2为进一步转染非胰岛β细胞,对糖尿病进行基因治疗奠定了基础。

关 键 词：胰岛素原 腺病毒载体/pAdEasy-1 弗林蛋白酶 

分 类 号：Q782[生物学—分子生物学]