槲树DNA SSR-PCR反应体系的正交优化  

Optimization of SSR-PCR Reaction System of Quercus dentata by Orthogonal Design

作　　者：叶青雷[1] 王玲玲[1] 藏楠[1] 陈丹[1] 王学英[1] 

机构地区：[1]沈阳农业大学生物科学技术学院

出　　处：《蚕业科学》2008年第2期307-311,共5页ACTA SERICOLOGICA SINICA

基　　金：辽宁省重点实验室专项课题[编号辽科发(2005)36]

摘　　要：利用正交设计L16(45)对槲树(Quercus dentata Thunb.)基因组DNASSR-PCR反应体系的5个因素(Tap酶,Mg2+,,模板DNA,dNTP,引物)在4个水平上进行优化试验,筛选出各反应因素的最佳水平,建立了槲树模板DNASSR-PCR反应的最佳体系(20μL):60ng模板DNA,2mmol/LMg2+,0.075U/μLTaq酶,0.4mmol/L dNTP,引物浓度0.1μmol/L。对槲树DNASSR-PCR最佳反应体系的退火温度进行了梯度试验,最佳退火温度为51.3℃。Orthogonal design was used to optimize SSR-PCR amplification system for Quercus dentata Thunb in terms of 5 factors （ Taq DNA polymerase, Mg^2＋, DNA template,dNTP and primer） from 4 levels. An optimal SSR-PCR system for Quercus dentata Thunb was obtained as 60 ng DNA template, 2 mmol/L Mg^2＋, 0. 075 U/wL Taq DNA polymerase, 0.4 mmol/L dNTP,and 0, 1 wmol/L primer for 20μL reaction system. The optimal annealing temperature for SSR-PCR reaction system was determined as 51.3℃ by gradient PCR.

关 键 词：槲树 SSR标记 反应体系 正交设计 

分 类 号：S792.18[农业科学—林木遗传育种]