人γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶催化亚单位基因E-box元件功能初步分析  

Preliminary analysis of the E-box element in human γ-glutmylcysteine synthetase catalytic subunit gene

作　　者：罗伶俐[1] 邹国民[1] 李冰[2] 冉丕鑫[1] 

机构地区：[1]广州医学院第一附属医院,广州呼吸疾病研究所,呼吸疾病国家重点实验室,广东广州510182 [2]广州医学院实验医学研究中心,广东广州510182

出　　处：《中国病理生理杂志》2008年第7期1428-1430,共3页Chinese Journal of Pathophysiology

基　　金：国家自然科学基金资助项目(No.30170401);广东省自然科学基金团队基金资助项目(No.05200239)

摘　　要：目的:探讨人支气管上皮细胞γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶催化亚单位(GCLC)基因上游调控序列E-box元件的功能。方法:利用PCR法克隆人GCLC基因上游调控序列,PCR重叠延伸法对2个E-box元件分别和同时进行定点突变。扩增获得的突变体片段克隆入PMD18-T载体,DNA测序鉴定后,亚克隆入野生型GCLC-Luc荧光素酶报道载体。将3个突变体质粒和野生型质粒转染人肺泡上皮细胞A549和人支气管上皮细胞16HBE,检测转染后细胞荧光素酶活性值。结果:测序结果证实,成功将E-box1CACGGG突变为AGCGGG;E-box2CACGTG突变为CACGGA。GCLC-Luc、GCLC-mEbox1-Luc(突变E-box1)、GCLC-mEbox2-Luc(突变E-box2)、GCLC-mEbox12-Luc(突变E-box1和E-box2)转染A549细胞后荧光素酶活性值分别为(5197852±132206)U、(5455692±127431)U、(5315722±244197)U、(5174303±183179)U,转染16HBE细胞后荧光素酶活性值分别为(141157±18907)U、(126454±23724)U、(137315±22179)U、(132441±28970)U。经过统计学分析,各组荧光酶活性没有显著差别,均P>0.05。结论:E-box元件不参与基础状态下A549细胞和16HBE细胞GCLC基因转录调控。

关 键 词：16HBE细胞 A549细胞 基因 GCLC Γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶 

分 类 号：R979.1[医药卫生—药品] R134.4[医药卫生—药学]