血小板生成素突变体的克隆和扩增及其融合蛋白在大肠杆菌中高效表达的研究  

High expression of human thrombopoietin mutant fusion protein in E.coli

作　　者：田生礼[1,2] 刘丽[1,2] 冯彪[1,2] 刘及[1,2] 

机构地区：[1]白求恩医科大学预防医学院 [2]解放军空军总医院分子生物学研究中心

出　　处：《中华血液学杂志》1997年第12期634-637,共4页Chinese Journal of Hematology

摘　　要：目的：通过获得编码血小板生成素（Ｔｐｏ）成熟肽Ｎ端１～１９６个氨基酸的突变体ｃＤＮＡ在大肠杆菌ＪＭ１０９中的表达，为Ｔｐｏ进一步的结构和功能研究提供材料来源。方法：用多聚酶链反应（ＰＣＲ）及ＤＮＡ重组技术，将ＰＣＲ产物克隆到ｐＵＣ１９载体并测序，然后克隆到表达载体ｐＭＡＬ－ｃ２上。结果：转化重组质粒ｐＭＡＬ－ＭＢＰ／ＴｐｏＭ的大肠杆菌经异丙基－β－Ｄ－硫代半乳糖苷诱导４～５小时，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析显示融合蛋白（ＭＢＰ／ＴｐｏＭ）的分子量约为６．３万。薄层扫描分析表明该蛋白占菌体总蛋白量的３７％。结论：经ＰＣＲ方法扩增的Ｔｐｏ基因突变体可在大肠杆菌中高效表达，为Ｔｐｏ突变体的进一步结构和功能研究以及Ｔｐｏ抗体的制备打下了基础。Objective:To obtain human thrombopoietin (Tpo)mutant cDNA encoding mature peptide N terminal 1～196 amino acids and investigate its expression in E.coli JM109.Methods:Polymerase chain reaction and DNA recombination techniques were employed.PCR product was inserted into pUC19 vector and sequenced and then cloned into expression vector pMALc2.Results:E.coli JM109 cells with plasmid pMAL MBP/TpoM were induced by IPTG for 4～5 hours.SDSPAGE analysis showed that MBP/TpoM molecular weight is about 63000.Scanning analysis indicated that expressed protein accounts up to 37% of total E.coli proteins.Conclusion:The Tpo mutant of interest is successfully expressed in E.coli JM109 cells.

关 键 词：血小板生成素 突变体 融合蛋白 基因表达 

分 类 号：Q753[生物学—分子生物学]