瓠瓜ISSR-PCR反应体系优化  

ISSR-PCR reaction system optimization for Lagenaria siceraria (Mol.) Stand

作　　者：高山[1] 许端祥[1] 林碧英[1] 钟开勤[2] 

机构地区：[1]福建省福州市蔬菜科学研究所,福建福州350012 [2]福建农林大学园艺学院,福建福州350002

出　　处：《福建农业学报》2008年第2期182-185,共4页Fujian Journal of Agricultural Sciences

基　　金：福州市科技星火项目(2005-03)

摘　　要：利用正交设计L9（3^4），对瓠瓜ISSR—PCR反应体系的4因素（dNTP、71物、Mg^2＋、Taq酶）在3水平上进行优化试验，建立适合瓠瓜ISSR—PCR反应体系，结果表明，在25μL反应体系中，含1×PCRbuffer、200μmol·L^-1dNTP、0．5μmol·L^-1引物、2．5mmol·L^-1MgCl2、30ng模板DNA、0．75U的Taq酶为最佳处理；通过PCR梯度测验，瓠瓜ISSR扩增适宜的退火温度比Tm值高2～6℃。The ISSR - PCR amplification system in Lagenaria siceraria （Molina） Stand was optimized by using orthogonal design with 3 levels of 4 factors （i. e. , dNTP,primer,Mg^2＋ and Taq DNA polymerase）. The optimal reaction conditions of ISSR - PCR were： 1 ×PCR buffer, 200 μmol · L^-1 dNTP, 0.5 μmol · L^-1 primer, 2.5 mmol · L^-1 MgCl2,30 ng template DNA and 0.75 U Taq DNA polymerase in 25 μL reaction volume. The optimized annealing temperature was 2-6℃ higher than the Tm of the corresponding primer by gradient PCR.

关 键 词：瓠瓜 ISSR 正交设计 梯度PCR 

分 类 号：S642.9[农业科学—蔬菜学]