猪繁殖和呼吸综合症病毒河南地方株ORF5/6基因的克隆及真核表达  

作　　者：党占国[1] 李志勇 夏平安[1] 陈溥言[3] 崔保安[1] 李伟娟[1] 王中明[1] 

机构地区：[1]河南农业大学牧医工程学院,郑州450002 [2]焦作市动物疫病预防控制中心,焦作454003 [3]南京农业大学动物医学院,南京210095

出　　处：《畜牧兽医科技信息》2008年第8期22-25,共4页Chinese Journal of Animal Husbandry and Veterinary Medicine

基　　金：中国博士后基金项目资助(No20060390944)

摘　　要：应用RT-PCR方法分别扩增出猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)河南地方株的ORF5和0RF6基因。将扩增基因克隆入真核表达载体pcDNA3.0中,设计不同引物自行构建重组质粒PcDNA-ORF5、ORF6和pcDNA-ORF5/6。运用磷酸钙法将重组质粒分别瞬时转染293T细胞,经流式细胞和westbloting试验分析表明共表达重组质粒PcD-NA-ORF5/6表达蛋白能够与PRRSV的阳性血清发生特异性反应,而pcDNA-ORF5-ORF6在293T细胞很难检测到蛋白表达。该结果表明蛋白质生物活性和其蛋白质空间构象有一定关系,也为下一步进行构建PRRSV假型病毒来研究ORF5/6蛋白的结构与功能的关系奠定了基础。

关 键 词：PRRSV ORF5/6基因 克隆 真核表达 

分 类 号：S858.28[农业科学—临床兽医学]