结核分枝杆菌4-二磷酸胞苷-2-C-甲基-D-赤藓糖醇合成酶的分离纯化与酶学特性  

Purification and Characterization of a Recombinant 4-Diphosphocytidyl-2-C-methyl-D-erythritol Synthetase from Mycobacterium tuberculosis

作　　者：施文钧[1] 张雪莲[1] 张旻[1] 赖旭卉[1] 王洪海[1] 

机构地区：[1]复旦大学生命学院遗传学研究所遗传工程国家重点实验室

出　　处：《中国医药工业杂志》2008年第8期580-583,共4页Chinese Journal of Pharmaceuticals

基　　金：上海市科委登山计划(06JC14012);863高科技计划(2007AA02Z316);国家自然科学基金(30670109)

摘　　要：克隆并表达了结核分枝杆菌H37Rv的4-二磷酸胞苷-2-C-甲基-D赤藓糖醇(CDP-ME)合成酶基因,并纯化该蛋白。经HPLC和聚丙烯酰胺凝胶电泳分析表明该蛋白为同二聚体,Mg2+为最适二价金属离子。对辅因子的底物特异性高,最适底物为胞苷三磷酸(CTP)。CTP和2-C-甲基-D-赤藓糖醇-4-磷酸(MEP)的Km值分别为92和43μmol/L,Vmax为7.8μmol·(min·mg)-1。4-Diphosphocytidyl-2-C-methyl-D-erythritol（CDP-ME） synthetase gene was cloned from Mycobacterium tuberculosis H37Rv by PCR amplification and expressed in E.coli BL21 （DE3）. The purified protein was identified as a homodimer with high specificity for pyrimidine bases by HPLC and PAGE. Its maximal activity was found in the presence of cytidine triphosphate （CTP） and Mg^2＋. The Km for CTP and 2-C-methyl-D-erythritol-4-phosphate （MEP） is 92 and 43μmol/L. The Vmax, is 7.8μmol· （min·mg） ^-1.

关 键 词：结核分枝杆菌 CDP-ME合成酶 表达 纯化 

分 类 号：Q55[生物学—生物化学]