山羊痘病毒P32基因的克隆、测序及在原核细胞表达  

作　　者：程振涛[1] 岳筠[1] 徐春志[1] 李永明[1] 许乐仁[1] 文明[1] 周碧君[1] 

机构地区：[1]贵州大学动物疫病研究所/贵州大学动物科学学院,贵州贵阳550025

出　　处：《江苏农业科学》2008年第4期57-60,共4页Jiangsu Agricultural Sciences

基　　金：教育部科学技术研究重点项目(编号:206132);贵州省优秀科技教育人才省长专项基金(编号:200612);高层次人才科研条件特助经费项目(编号:TZJF-200606)

摘　　要：为比较山羊痘病毒贵州分离株P32基因与国内外分离株的关系,并获得P32蛋白,应用PCR方法从贵州山羊痘病毒分离株的核酸样本中扩增出P32基因片段,将PCR产物克隆至pMD18-T载体,对重组质粒进行了基因序列测定。将测定的P32基因核苷酸序列和推导的氨基酸序列与GenBank中相应序列作比较,同源性分别达到99.4%和98.4%,表明山羊痘病毒的P32基因具有高度保守性。将P32基因克隆至原核表达载体pET-28a,成功构建重组表达质粒pET-28a-P32/LD,转化至大肠杆菌BL21(DE3)进行诱导表达。SDS-PAGE检测显示,重组细菌在35.5 kDa处表达一条特异性的蛋白带,而阴性对照未见这条蛋白带;Western-Blotting检测证实,这条蛋白带能与山羊痘高免血清反应而显示其免疫学活性。

关 键 词：山羊痘病毒 P32基因 基因克隆 序列分析 原核表达 

分 类 号：S852.654[农业科学—基础兽医学]