濒危植物巴东木莲ISSR分子标记技术体系的建立  

作　　者：李晓玲[1] 温国莉[1] 陈发菊[1] 梁宏伟[1] 何正权[1] 

机构地区：[1]三峡大学生物技术研究中心/天然产物研究与利用湖北省重点实验室,湖北宜昌443002

出　　处：《江苏农业科学》2008年第4期70-73,共4页Jiangsu Agricultural Sciences

基　　金：国家自然科学基金(编号:30670202);湖北省自然科学基金(编号:2006ABA201)

摘　　要：利用正交设计建立和优化适合于濒危植物巴东木莲的ISSR-PCR分子标记技术体系。对影响ISSR-PCR反应的多个因素,包括引物和DNA模板浓度、Taq酶用量、Mg2+和dNTPs浓度以及PCR扩增的退火温度、退火时间及循环次数等进行了优化。结果表明,适于巴东木莲ISSR-PCR反应的分子标记技术体系为:反应总体积20μl,含2μl 10×buffer、1μl 20 mmol/L MgCl2、4μl 2μmol/L引物、0.4μl 10 mmol/L dNTPs、0.8μl 5 U/μlTaq酶及40 ng模板DNA;PCR扩增程序为:94℃预变性5 min,94℃变性30 s,54℃复性45 s,72℃延伸1.5min,35个循环,最后72℃延伸7 min。本研究建立的ISSR分子标记技术体系稳定性强,重复性高。

关 键 词：巴东木莲 ISSR 分子标记 正交设计 优化 

分 类 号：Q943.2[生物学—植物学]