人TLR2胞外区基因的原核表达及其抗体的制备  

作　　者：孙守勋[1] 李强[1] 刘静[1] 李玲[1] 蒲晓允[1] 

机构地区：[1]第三军医大学附属新桥医院检验科,重庆400037

出　　处：《细胞与分子免疫学杂志》2008年第9期887-889,共3页Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology

基　　金：全军"十一五"面上项目(2006B060);"创伤;烧伤与复合伤国家重点实验室"开放基金资助项目(2006B-2)

摘　　要：目的:在原核系统中表达人Toll样受体2(TLR2)胞外区基因的融合蛋白并制备多克隆抗体。方法:应用RT-PCR方法从人外周血单个核细胞中扩增TLR2胞外区基因,将其克隆到表达载体pET-32a(+)上构建重组原核表达质粒,并在大肠杆菌中诱导表达,目的融合蛋白经Ni-NTA亲和层析纯化,用SDS-PAGE和Western blot进行鉴定。用纯化的蛋白免疫新西兰白兔,制备多克隆抗体,采用Western blot对抗体进行鉴定,并用ELISA分析抗体活性。结果:成功构建了pET-32a(+)-TLR2重组表达质粒并在大肠杆菌中进行表达,获得了纯化重组蛋白,重组蛋白免疫白兔后能够有效地刺激抗体产生,并具有良好的免疫活性。结论:成功地获得人TLR2胞外区基因的融合蛋白,制备的多克隆抗体为进一步研究TLR2胞外区的功能和生物活性奠定基础。

关 键 词：TLR2 原核表达 多克隆抗体 单个核细胞 

分 类 号：R392.11[医药卫生—免疫学]