猪SLA-DRB基因的克隆及在大肠杆菌的表达  

作　　者：吴雪斌[1] 李学伟[1] 

机构地区：[1]四川农业大学动物科技学院,四川雅安625014

出　　处：《甘肃畜牧兽医》2008年第5期1-4,共4页Gansu Animal Husbandry and Veterinary Medicine

基　　金：教育部"长江学者和创新团队发展计划"的"猪抗病营养的分子机制"项目资助;编号:IRT0555-6

摘　　要：试验旨在通过基因工程方法获得重组猪SLA-DRB蛋白。根据基因库猪SLA-DRB基因序列设计合成特异性引物,引物两端分别加上BamHⅠ和XhoⅠ酶切位点及保护碱基;提取长白猪肠系淋巴结RNA,用RT-PCR的方法扩增猪SLA-DRB基因cDNA,并将其克隆到pMD18-T载体上,测序后经BamHⅠ和XhoⅠ双酶切后克隆到pET-32a(+)中,构建原核表达载体pET-32a-DRB;将重组表达质粒转化至宿主菌Rosseta中,诱导表达。结果表明,成功扩增出猪SLA-DRB基因cD-NA,经DNA序列测定,所得基因与国外报道的序列99.9%相同;成功构建原核表达载体pET-32a-DRB;经IPTG诱导,表达出了6×His-DRB融合蛋白,对表达的蛋白用SDS-PAGE电泳分析,得到了约50kDa左右蛋白,与预期大小相符,表明猪SLA-DRB基因在大肠杆菌中成功的进行了表达。

关 键 词：SLA—DRB基因 克隆 原核表达 

分 类 号：S828[农业科学—畜牧学]