重组鸡β-防御素10蛋白的原核表达及其抗菌活性的测定  被引量:16

Expression of recombinant chicken avian beta-defensin 10 in E.coli and determination of its antimicrobial activity

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作  者:廖文艳[1] 马得莹[1] 韩宗玺[2] 刘胜旺[2] 

机构地区:[1]东北农业大学动物营养研究所,黑龙江哈尔滨150030 [2]中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/禽传染病研究室,黑龙江哈尔滨150001

出  处:《中国预防兽医学报》2008年第10期765-769,789,共6页Chinese Journal of Preventive Veterinary Medicine

基  金:NOVUS国际科学研究基金;黑龙江省教育厅科研重点项目(No.1153lz05);国家自然科学基金(30600435)

摘  要:鸡抗菌肽属β-防御素类,在鸡的先天性免疫中发挥重要作用。本研究将克隆得到的鸡β-防御素-10基因(AvBD10)亚克隆到原核表达载体pGEX-6p-1中构建了重组表达质粒pGEX-AvBD10。将重组质粒转化至BL21,于37℃用IPTG诱导培养不同时间,SDS-PAGE电泳与灰度扫描显示该重组蛋白表达量占菌体总蛋白的34.3%。表达的AvBD10融合蛋白以包涵体的形式存在,分子量约为31ku。重组蛋白经纯化后,以对数生长中期的大肠杆菌、多杀性巴氏杆菌、金黄色葡萄球菌、嗜酸乳杆菌、枯草芽胞杆菌和猪霍乱沙门氏菌为检测菌,利用薄层平皿琼脂糖孔穴扩散法测定了重组鸡AvBD10蛋白的抗菌活性。结果显示,重组鸡AvBD10蛋白对大肠杆菌、多杀性巴氏杆菌、金黄色葡萄球菌、嗜酸乳杆菌、枯草芽胞杆菌有抗菌活性。此外,重组鸡AvBD10蛋白在-70℃~100℃及在pH4~pH10条件下仍具有抗菌活性。Chicken antimicrobial peptides, known as β-defensins encoded by AvBDs gene, play significant roles in innate immunity in chickens. The cDNA of chicken AvBD10 gene was cloned into pGEX-6p-1 vector and transfer into E.coli BL21 cells. Protein expression was induced with IPTG at 37℃. SDS-PAGE analysis showed that a 31 ku protein equivalent to chicken AvBD10 protein in molecular weight was expressed in E.coli BL21. The recombinant chicken AvBD10 exhibited expected antibacterial activity against Escherichia coli, Lactobacilli acidophilus, Bacillus subtilis, Staphylococcus aureus, Pasteurella multocida, Hogcholera salmonella, as measured by inhibition zone assay.

关 键 词:鸡AvBD10 融合蛋白 抗菌活性 

分 类 号:S852.4[农业科学—基础兽医学] Q78[农业科学—兽医学]

 

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