重组AAV1/hFIX病毒制备及其体外转导培养细胞的实验研究  

Preparation of rAAV1/hFIX and study of transfected cells in vitro

作　　者：彭建强[1] 郭莹[1] 吴小兵[2] 袁振华 曹晖 

机构地区：[1]湖南省人民医院心内科,湖南长沙410078 [2]中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所病毒基因工程国家重点试验室,北京100052 [3]国家863生物领域病毒基因载体研发基地,北京100176

出　　处：《中国现代医学杂志》2008年第18期2635-2638,共4页China Journal of Modern Medicine

基　　金："863"高科技发展计划基因治疗重大关键技术资助项目(No:863-BH03-05-02)

摘　　要：目的制备携带人凝血因子IX基因的重组AAV1病毒(rAAV1/hFIX),体外转导C2C12细胞并检测hFIX的表达。方法通过"一株载体细胞/一株辅助病毒"的双因素包装策略制备出rAAV1/hFIX,体外转导C2C12细胞后,检测细胞上清中FIX的表达量。结果制备出了高纯度的rAAV1/hFIX病毒,转导C2C12细胞24h后在上清中即可检测到hFIX,连续检测了120h都有表达,24h最高表达量高达到(68.0±3.2)ng/24h。结论制备的rAAV1/hFIX病毒在体外培养细胞中能高水平表达hFIX,为应用基因治疗载体治疗血友病B的体内实验奠定了基础。[Objective] To prepare the rAAV1/hFIX and assay expression of the hFIX antigen by transfecting C2C12 cell in vitro. [Method] The rAAV-2/hFIX was prepared by ＂one helper virus-one vector cell line＂ strategy and transfeeted C2C12 ceils in vitro and then assayed the hFIX antigen content of cell culture medium. [Result] The hFIX antigen could betested at 24 h after tansfected and also in following 120 h, their expression highest level average reached （68±3.2） ng/24 h. [Conclusion] The rAAV1/hFIX transfected C2C12 cells could efficiently expressed hFIX antigen. The results provided the basis of gene thrapy of hemophilia B by rAAV1.

关 键 词：重组腺相关病毒1 人凝血因子IX B型血友病 基因治疗 

分 类 号：R373[医药卫生—病原生物学]