粪产碱菌nif H,nif D和部分nif K的克隆、定位及序列分析  

作　　者：张海予[1] 萧凤回 朱新生[1] 林敏[3] 方宣钧[3] 尤崇杓[3] 萧凤回 

机构地区：[1]北京大学蛋白质工程及植物基因工程国家重点实验室,北京100871 [2]云南农业大学农业科学和技术学院,昆明650201 [3]中国农业科学院原子能利用研究所,北京100094

出　　处：《中国科学（C辑）》1997年第6期492-496,共5页Science in China(Series C)

基　　金：国家"八六三"计划生物领域资助项目

摘　　要：提取粪产碱菌(Alcaligenes faecalis)总DNA,经限制性内切酶酶切和琼脂糖凝胶电泳,以含肺炎克氏杆菌(Klebsiella pneumoniae)nif H和nif H-D基因的DNA片段为探针进行Southern杂交,筛选出与nif HDK同源的4.6kb片段,克隆到pBluesript SK^+载体上,构建了重组质粒pBZl.经亚克隆、酶切、DNA序列分析后发现,粪产碱菌具有与其它固氮菌相似的结构特征,其nif HDK共用1个启动子,具有上游激活序列UAS,RNA聚合酶σ^(54)因子识别序列、1个A-T富集区和SD序列.nifH和nif D的阅读框架分别为888和1476bp,GC含量各为61.6%和60.2%.nifH-nif D和nif D-nif K的基因间隔区长度分别为101和105bp,各存在1个7bp的反向重复和1个SD序列.由阅读框架(ORF)推导的铁蛋白和钼铁蛋白α亚基的氨基酸序列与其它固氮菌相比有较高的同源性,高度保守的氨基酸残基所处的位置也很相似.同源性比较说明,粪产碱菌与棕色固氮菌(Azotobacter vinelandii)同源性最高.

关 键 词：粪产碱菌 固氮酶基因 克隆 序列分析 

分 类 号：Q939.103[生物学—微生物学]