鸭肠炎病毒UL6基因B细胞表位的预测及其主要抗原域的原核表达  

Prediction of epitopes on B cell of UL6 gene of duck enteritis virus and prokaryotic expression of major antigen determinant sequence

作　　者：孙涛[1] 程安春[1,2] 汪铭书[1,2] 郭宇飞[1,2] 贾仁勇[2] 沈婵娟[2] 

机构地区：[1]四川农业大学动物医学院禽病防治研究中心,四川雅安625014 [2]动物疫病与人类健康四川省重点实验室,四川雅安625014

出　　处：《中国兽医科学》2008年第11期939-945,共7页Chinese Veterinary Science

基　　金：国家"十一五"科技支撑计划项目(2007Z06-017);国家农业科技成果转化资金项目(2006GB2F000249);国家自然科学基金项目(30771598);教育部"新世纪优秀人才支持计划"项目(NCET-06-0818);高等学校科技创新工程重大项目培育资金项目(706050);四川省基础研究项目(05JY029-109/2006J13-048/07JY029-017);四川省重点建设学科项目(SZD0418)

摘　　要：采用DNAStar Protean程序，综合运用二级结构、亲水性、可塑性和抗原性指数等参数，对鸭肠炎病毒（DEV）CHv毒株UL6基因（GenBank登录号EF055890）的氨基酸序列进行了B细胞表位预测。结果显示，UL6蛋白羧基端第Thr507～Gln515、Thr521～Met529、Asp531～Phe539、Gly544～Asn562、Thr568～Gln585、Lys592～Val604、A1a681～Ala778和Tyr780～Lys790区域内含有优势B细胞表位。以DEV CHv毒株基因组作为PCR模板，利用Oligo6．0软件设计了1对引物，整体扩增涵盖上述具有优势表位的基因片段，将其亚克隆到原核表达载体pET-32a（＋）中，获得表达载体pET-32a—UL6M，再将其转化至E．coli Rosetta（DE3），经IPTG诱导，外源基因获得了良好表达。以免抗DEV多克隆血清进行Western blot分析，抗血清可与该融合蛋白发生特异性反应。提示，该氨基酸片段可能含有软件预测的线性表位区。Using DNAStar Protean software,the amino acid sequence encoded by UL6 gene（GenBank accession number EF055890） of duck enteritis virus（DEV） CHv strain was analyzed in secondary structure, hydrophilicity, flexibility and antigenic indexes to predict B cell epitopes. Many distinct antigen epitopes were situated in the C-terminal regions of Thr507 - Gln515, Thr521 - Met529, Asp531 - Phe539, Gly544-Asn562, Thr568 - Gln585, Lys592 - Va1604, Ala681 - Ala778 and Tyr780 - Lys790. A fragment encoding UL6 major epitopes was amplified by PCR and subcloned the sequence into the prokaryotic expression vector pET 32a（＋ ）. The recombinant plasmid pET-32a-UL6M was transformed into Escherichia coli Rosetta（DE3） and expressed under the induction of IPTG. Western-blot analysis indicated that polyclonal rabbit anti serum against DEV had specific reaction with the recombinant protein. These results indi cared that the predicted antigenic region may contain the linear epitopes.

关 键 词：鸭肠炎病毒 UL6基因 B细胞表位预测 抗原域 原核表达 

分 类 号：S852.659.1[农业科学—基础兽医学]