NT-3基因逆转录病毒表达载体的构建  

作　　者：董智勇[1] 李忱[1] 陈东[2] 孟晓婷[1] 陈雷[3] 路来金[3] 

机构地区：[1]吉林大学白求恩医学院,吉林长春130021 [2]广东医学院组织学与胚胎学教研室,广东东莞523808 [3]吉林大学第一医院手外科,吉林长春130021

出　　处：《细胞与分子免疫学杂志》2008年第11期1072-1073,1078,共3页Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology

基　　金：国家自然科学基金资助项目(30471742);吉林省科技发展计划资助项目(200705372)

摘　　要：目的:分离大鼠神经营养素-3(NT-3)基因,构建pLEGFP-NT3逆转录病毒表达载体。方法:利用RT-PCR技术钓取大鼠NT-3基因,克隆到测序载体pMD18-T中,测序后再亚克隆到逆转录病毒载体pLEGFP-C1中,通过Lipofectamine 2000导入包装细胞PA317。结果:RT-PCR产物为776bp,经测序鉴定虽与GenBank中NT-3基因的序列相差1个碱基,但不影响NT-3蛋白质的表达;构建的pLEGFP-NT3重组载体经酶切鉴定,证实NT-3基因片段正确插入pLEGFP-C1载体中。转染包装细胞后,激光共聚焦显微镜下观察导入NT-3基因的PA317细胞发绿色荧光。结论:分离得到了大鼠NT-3基因成功构建了pLEGFP-NT3表达载体。

关 键 词：神经营养素3 逆转录病毒载体 重组 

分 类 号：R329.5[医药卫生—人体解剖和组织胚胎学]